酵母单杂交文库构建及巨峰葡萄VvFT基因启动子上游调控因子筛选

发布时间：2023-01-29 17:45

　　【目的】利用酵母单杂交文库筛选巨峰葡萄VvFT基因启动子上游调控因子,挖掘参与调控葡萄开花时间的因子,为揭示花期转变代谢通路和定向改良葡萄品种提供理论参考。【方法】利用PlantCARE分析预测VvFT基因启动子顺式作用元件,并以VvFT基因启动子为诱饵,利用酵母单杂交文库筛选技术,筛选作用在VvFT基因启动子上游的调控因子。【结果】葡萄VvFT基因启动子区域存在13种启动子顺式作用元件,包括A-box、CAAT-box和TATA-box组成型调控元件;光响应调控元件ATC-motif、Box 4、G-Box和GT1-motif;茉莉酸甲酯（MeJA）响应调控元件CGTCA-motif和TGACG-motif;干旱诱导的MYB结合位点元件MBS;玉米蛋白代谢必需的调控元件O2-site;参与生物钟控制的调控元件circadian;厌氧诱导必需调控元件ARE。以VvFT基因启动子为诱饵,筛选获得34条表达序列标签（EST）,其中有21条为未知功能,有13条在植物生长、抗逆防御、信号转导、转录调控、蛋白酶等方面均有已知或预测的功能,包括转录抑制因子ft41、GRF1互作因子ft44、NAP... 

【文章页数】：9 页

【文章目录】：
0 引言
1 材料与方法
    1.1 试验材料
    1.2 试验方法
        1.2.1 Vv FT启动子克隆及序列分析
        1.2.2 诱饵载体p Ab Ai-p Vv FT构建
        1.2.3 诱饵载体p Ab Ai-p Vv FT转化酵母菌株
        1.2.4 c DNA文库构建
        1.2.5 Vv FT基因启动子互作蛋白筛选
        1.2.6 酵母单杂交点对点验证互作蛋白
2 结果与分析
    2.1 Vv FT基因启动子序列分析
    2.2 诱饵菌株Y1H-pAbAi-pVvFT构建
    2.3 c DNA文库构建及互作蛋白筛选
    2.4 EST序列的BLASTx分析和功能注释结果
    2.5 Vv Dna J10与Vv FT基因启动子互作验证结果
3 讨论
4 结论


【参考文献】：
期刊论文
[1]水稻高盐胁迫下的酵母双杂交文库构建及OsRPK1胞内互作蛋白质的筛选[J]. 邹禹,刘园园,钱宝云,占新春,郑乐娅,张炜,张培江.  江苏农业学报. 2019(04)
[2]葡萄赤霉素合成关键基因VvGA20ox2的克隆、亚细胞定位和表达分析[J]. 高世敏,董阳,王武,陶建敏.  江苏农业学报. 2018(06)
[3]调控植物花发育的MYB类转录因子研究进展[J]. 钱景华,李增强,廖小芳,汤丹峰,史奇奇,周瑞阳,陈鹏.  生物技术通讯. 2016(02)
[4]籼稻与粳稻花时对茉莉酸甲酯（MeJA）响应的敏感性差异[J]. 闫志强,徐海,马作斌,高东昌,徐正进.  中国农业科学. 2014(13)
[5]茉莉酸甲酯在杂交粳稻制种中的应用研究[J]. 张旺,曾晓春,周燮,沈惠源,吴天锡.  杂交水稻. 2000(03)



本文编号：3732729