自组装纳米粒子铁蛋白增强防龋疫苗黏膜免疫反应

发布时间：2021-03-20 13:32

　　[目的]葡糖基转移酶GtfB为致龋菌变形链球菌的胞外抗原,羧基端葡聚糖结合区Glu为GtfB所包含的功能区之一。本研究中的Glu-FTH为Glu与铁蛋白（ferritin,FTH）融合表达、自组装所形成的纳米粒子防龋多肽疫苗。通过大肠杆菌蛋白表达系统提取融合蛋白Glu-FTH,应用镍柱亲和层析技术纯化Glu-FTH。观察防龋疫苗Glu-FTH对树突状细胞（dendritic cells,DCs）的活化作用,以及DC对Glu-FTH的摄取作用。评价Glu-FTH的黏膜免疫反应和龋齿保护作用,探索FTH对防龋疫苗黏膜免疫反应水平和类型的影响。[方法]应用镍柱亲和层析技术纯化融合蛋白Glu-FTH,根据SDS-PAGE分析纯化条件。依据western blot技术验证蛋白纯化的结果。随后通过透射电镜观察Glu-FTH的形态并分析其粒径分布。将6周BALB/c小鼠随机分为5组,即Glu-FTH、Glu、FTH、Glu+Poly（I:C）、PBS组。经滴鼻途径免疫小鼠,首次免疫（第0周）后,于第2、4周加强免疫。第0、2、4、6、8、10、12、16、20周,收集血清、唾液。ELISA检测血清中... 

【文章来源】：武汉大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１蛋白Ｇｌｕ－ＦＴＨ自组装示意图??

保持流速为１０滴／分钟，收集穿流液。??保存：向柱内加５倍柱体积的１％脱氧胆酸钠除残留内毒素。向柱内加２５％乙醇，于４°Ｃ保试剂生物科技股份有限公司检测细菌内毒素二、实验结果??粒ｐＥＴ２８ａ?（＋）?－Ｇｌｕ－ＦＴＨ的鉴定??２８ａ（＋）－Ｇｌｕ－ＦＴＨ由本组前期构建，在将其切酶酶切对该表达载体进行鉴定。重组质粒双酶后，产生两个大小分别为１４６４ｂｐ、２７１０段、质粒ｐＥＴ２８ａ的预测值相符。质粒测序－Ｇｌｕ－ＦＴＨ?（图?３－１）。??Ｍａｒｋｅｒ?１?２??

自组装纳米粒子铁蛋白增强防鋪疫苗黏膜免疫反应??蛋白，其中２００ｍＭ和５００ｒａＭ咪唑可洗脱目的蛋白，其分子量约为２１ｋＤａｊｅｓｔｅｒｎ??ｂｌｏｔ也对三种目的蛋白进行了验证（图３－２）。本实验的蛋白提取、纯化效果较??好。??Ａ?１２?３?４?Ｓ?６?７?Ｂ?Ｍ?＇?？?Ｉ?／??１知???９＾?—?咿，??７２?—?｜Ｋ?，？额ｇｇｗｙ???ｃ．ｈ?ｔｔｈ??—着鑛＇?爾?—??羞—＾?二．二—?Ｗｔｋ?＾?－ｍｍ?＾ｍＫｍＪＳＢｋ?Ｗｔ￣＾－??ｐ?Ｍａｒｋｅｒ?Ｉ?２?３??Ｌ?４?Ｄ?Ｊ２０?ＨＰ，ｗｊ??＝＇＊?８５??扣?一?６０?＿?？??；?霉．．＿Ｔ?４，１??ｍｍｍ??图３－２重组蛋白ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳及Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ??Ａ．?１？７依次为：Ｇｌｕ－ＦＴＨ加ＩＰＴＧ培养（ＩＰＴＧ＋）的超声裂解后上清，未??加ＩＰＴＧ培养（ＩＰＴＧ－）的超声裂解后上清，上清穿流液（ＩＰＴＧ＋），ｌＯｒａＭ，２０禮，??６０ｍＭ


本文编号：3091085