嗜肺军团菌激活Nrf2-Keap1通路抑制小鼠RAW264.7巨噬细胞自噬

发布时间：2021-04-08 18:59

　　目的观察嗜肺军团菌（LP）对RAW264.7巨噬细胞自噬流及其自噬相关因子表达水平的影响并探讨其作用机制。方法活的LP和灭活的LP[感染复数（MOI）=10, 50, 100]分别处理RAW264.7巨噬细胞1、 2、 3 h,通过筛选得出MOI=50,处理2 h为其最佳作用条件。用雷帕霉素（RAPA）处理RAW264.7巨噬细胞12 h后,再加入活的和灭活的LP共培养2 h,并设正常对照组、 RAPA处理组、活LP组、 RAPA处理的活LP组、灭活LP组和RAPA处理的灭活LP组。用携带双荧光标记蛋白基因和微管相关蛋白1轻链3B（LC3B）基因的真核过表达质粒pmCherry-C1-EGFP-LC3B转染巨噬细胞,监测巨噬细胞自噬流的变化;用基因芯片在处理的最佳时间点筛选出LP影响巨噬细胞自噬的相关因子溶酶体/内体膜跨膜蛋白封闭蛋白（CLN3）、组蛋白去乙酰化酶6（HDAC6）、 G蛋白信号传导调节蛋白19（RGS19）、肿瘤坏死因子（TNF）、组织蛋白酶B （CTSB）、 GABA A型受体相关蛋白类似物2（GABARAPL2）、 P62、微管相关蛋白1轻链3（LC3）;实时荧光定... 

【文章来源】：细胞与分子免疫学杂志. 2019,35(10)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

不同剂量LP作用巨噬细胞后自噬流的变化(荧光显微镜, ×400)

LP处理巨噬细胞2 h后自噬流的变化(荧光显微镜, ×400)

基因芯片检测结果显示, 与细胞对照组相比, 灭活组上调LC3的表达, 下调P62的表达(P<0.05), 活LP组下调LC3的表达, 上调P62的表达(P<0.05); 与灭活LP组相比, 活LP组上调LC3的表达, 下调P62的表达(P<0.05, 图3)。2.3 活LP和灭活LP处理的巨噬细胞LC3B、 beclin1、 Keap1 mRNA水平降低P62、 Nrf2 mRNA表达水平增加


本文编号：3126082