脐血造血干/祖细胞在丝素膜上向内皮细胞分化及其信号转导机制的研究
发布时间：2021-11-28 03:16
目的:体外分离、纯化脐血CD34+造血干/祖细胞（CD34+细胞）,诱导其在再生丝素膜上向内皮细胞分化,并通过对其分化过程中血管内皮生长因子（VEGF）诱导的细胞内信号传导与转录活化因子（STAT）活化的研究,初步揭示CD34+细胞向内皮细胞分化的部分机制。方法:采集新鲜脐血,磁珠分选法（MACS）分离出CD34+细胞,分别接种到再生丝素膜（SF）和明胶包被的培养皿上,用含有VEGF和纤维细胞生长因子（bFGF）的M199培养基诱导分化。细胞形态学观察CD34+细胞生长情况,流式细胞仪检测诱导前后内皮细胞CD34,CD31及vWF表型,电镜观察验证内皮细胞胞浆内的Weibel-Palade小体（W-P小体）,并比较不同材料上CD34+细胞的贴壁率及向内皮细胞分化比率。进一步以丝素蛋白膜为载体培养WI-38人胚肺成纤维细胞,将本科室已构建的腺病毒介导的与干细胞内皮化密切相关的VEGF165基因（即Ad-VEGF165- PolyA-promoter-Ang1...
【文章来源】：苏州大学江苏省 211工程院校
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
细胞分化培养形态学观察(×100)
9图1-1 免疫磁珠分选前后细胞表面CD34+的表达2.2 细胞分化培养形态学观察刚分离的 CD34+细胞呈圆形，细胞形态小，不均匀地悬浮分布于培养皿底部；细胞培养 48h 后明胶组和 SF 组的 CD34+均可见细胞贴壁；3d 后有明显集落形成；7d 后集落形成较多，逐渐增大，开始出现极化细胞；10d 后可见梭形细胞从细胞簇周围开始生长，梭形的细胞出现典型的线样排列结构；14d 后内皮细胞长满瓶底并达到增殖高峰，细胞呈“铺路石”状排列。两组细胞的形态学观察无明显差别（如图 1-2）。图1-2 细胞分化培养形态学观察(×100)2.3 CD34+细胞向内皮细胞分化的比率及内皮细胞的计数统计情况细胞培养 6、8、10、12、14d 时对胶组和 SF 组培养细胞分别进行计数，数据采用 SAS 软件分析，明胶组和 SF 组细胞增殖能力无明显差异，p>0.05；在分化细胞比例方面
细胞平均贴壁率均较高，分别为 90.8％和85.2％，两组之间比较无差异（如图 1-3, p>0.05）。图1-3 不同材料上接种CD34+细胞的48h贴壁率(p>0.05)2.5 流式细胞仪检测脐血CD34+细胞分化为内皮细胞的效率流式细胞术检测的结果表明，刚分离的 CD34+细胞, CD34 阳性表达率为（98.78±1.06）％（如图 1-1B），CD31 阳性表达率为（14.92±5.21）％（如图 1-4）；细胞在 SF 和明胶上培养 10d 后，两组细胞 CD34 阳性表达率分别为（20.51±1.38）％、（17.59±3.11）％（如图 1-5A,1-5B），CD31 阳性表达率分别为（75.53±4.89）％、（74.59±3.58）％（如图 1-6A,1-6B），SF 组和明胶组细胞培养 10d 后的 CD34阳性表达率之间及 CD31 阳性表达率之间比较均无差异，p>0.05；在诱导 CD34+
【参考文献】：
期刊论文
[1]再生丝素膜对Ad-VEGF165转基因成纤维细胞基因表达的影响（英文）[J]. 刘铁连,谢宇锋,盛伟华,缪竞成,单云波,胡志清,井莹莹,贾红亮,杨吉成. 中国组织工程研究与临床康复. 2008(36)
[2]再生丝素膜生物相容性的实验研究[J]. 黄泉,杨吉成,缪竞诚,刘春宇,谢宇锋,盛伟华,李明忠. 苏州大学学报(工科版). 2007(02)
[3]几种丝素材料细胞毒性的实验研究[J]. 盛伟华,龚爱华,李明忠,谢宇锋,缪竞成,杨吉成,姜海燕,卢神州. 中国生物医学工程学报. 2005(03)
[4]再生丝素膜对鼠胚真皮层成纤维细胞遗传特性的影响[J]. 龚爱华,李明忠,盛伟华,谢宇锋,缪竞成,姜海燕,吴徽宇,杨吉成. 中国生物医学工程学报. 2005(01)
[5]腺相关病毒载体介导乳腺癌BA46基因转移的实验研究[J]. 尤长宣,罗荣城,苏瑾,张军一,廖旺军,郑航,Paul L Hermonat. 中华微生物学和免疫学杂志. 2004(09)
[6]丝素膜代人工硬脑膜的相容性研究[J]. 张世明,刘向阳,李明忠,李斌,戴燕芳. 中华神经外科杂志. 2004(04)
[7]人类涎腺细胞在几种生物材料上的生长[J]. 孙涛,王松灵,朱颉,杨新林. 北京口腔医学. 2003(01)
[8]bFGF及其受体的研究进展[J]. 李劲松. 上海免疫学杂志. 2002(05)
[9]IL-2信号转导中JAK/STAT途径的负调节机制[J]. 杨永杰. 国外医学(免疫学分册). 2002(02)
[10]体内外诱导CD34+细胞生成血管内皮细胞的方法及其组织工程学运用[J]. 谭强,沙慧芳,江晓丰,史振余,顾伟勇,周允中. 复旦学报(医学科学版). 2001(03)
本文编号：3523592
【文章来源】：苏州大学江苏省 211工程院校
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
细胞分化培养形态学观察(×100)
9图1-1 免疫磁珠分选前后细胞表面CD34+的表达2.2 细胞分化培养形态学观察刚分离的 CD34+细胞呈圆形，细胞形态小，不均匀地悬浮分布于培养皿底部；细胞培养 48h 后明胶组和 SF 组的 CD34+均可见细胞贴壁；3d 后有明显集落形成；7d 后集落形成较多，逐渐增大，开始出现极化细胞；10d 后可见梭形细胞从细胞簇周围开始生长，梭形的细胞出现典型的线样排列结构；14d 后内皮细胞长满瓶底并达到增殖高峰，细胞呈“铺路石”状排列。两组细胞的形态学观察无明显差别（如图 1-2）。图1-2 细胞分化培养形态学观察(×100)2.3 CD34+细胞向内皮细胞分化的比率及内皮细胞的计数统计情况细胞培养 6、8、10、12、14d 时对胶组和 SF 组培养细胞分别进行计数，数据采用 SAS 软件分析，明胶组和 SF 组细胞增殖能力无明显差异，p>0.05；在分化细胞比例方面
细胞平均贴壁率均较高，分别为 90.8％和85.2％，两组之间比较无差异（如图 1-3, p>0.05）。图1-3 不同材料上接种CD34+细胞的48h贴壁率(p>0.05)2.5 流式细胞仪检测脐血CD34+细胞分化为内皮细胞的效率流式细胞术检测的结果表明，刚分离的 CD34+细胞, CD34 阳性表达率为（98.78±1.06）％（如图 1-1B），CD31 阳性表达率为（14.92±5.21）％（如图 1-4）；细胞在 SF 和明胶上培养 10d 后，两组细胞 CD34 阳性表达率分别为（20.51±1.38）％、（17.59±3.11）％（如图 1-5A,1-5B），CD31 阳性表达率分别为（75.53±4.89）％、（74.59±3.58）％（如图 1-6A,1-6B），SF 组和明胶组细胞培养 10d 后的 CD34阳性表达率之间及 CD31 阳性表达率之间比较均无差异，p>0.05；在诱导 CD34+
【参考文献】：
期刊论文
[1]再生丝素膜对Ad-VEGF165转基因成纤维细胞基因表达的影响（英文）[J]. 刘铁连,谢宇锋,盛伟华,缪竞成,单云波,胡志清,井莹莹,贾红亮,杨吉成. 中国组织工程研究与临床康复. 2008(36)
[2]再生丝素膜生物相容性的实验研究[J]. 黄泉,杨吉成,缪竞诚,刘春宇,谢宇锋,盛伟华,李明忠. 苏州大学学报(工科版). 2007(02)
[3]几种丝素材料细胞毒性的实验研究[J]. 盛伟华,龚爱华,李明忠,谢宇锋,缪竞成,杨吉成,姜海燕,卢神州. 中国生物医学工程学报. 2005(03)
[4]再生丝素膜对鼠胚真皮层成纤维细胞遗传特性的影响[J]. 龚爱华,李明忠,盛伟华,谢宇锋,缪竞成,姜海燕,吴徽宇,杨吉成. 中国生物医学工程学报. 2005(01)
[5]腺相关病毒载体介导乳腺癌BA46基因转移的实验研究[J]. 尤长宣,罗荣城,苏瑾,张军一,廖旺军,郑航,Paul L Hermonat. 中华微生物学和免疫学杂志. 2004(09)
[6]丝素膜代人工硬脑膜的相容性研究[J]. 张世明,刘向阳,李明忠,李斌,戴燕芳. 中华神经外科杂志. 2004(04)
[7]人类涎腺细胞在几种生物材料上的生长[J]. 孙涛,王松灵,朱颉,杨新林. 北京口腔医学. 2003(01)
[8]bFGF及其受体的研究进展[J]. 李劲松. 上海免疫学杂志. 2002(05)
[9]IL-2信号转导中JAK/STAT途径的负调节机制[J]. 杨永杰. 国外医学(免疫学分册). 2002(02)
[10]体内外诱导CD34+细胞生成血管内皮细胞的方法及其组织工程学运用[J]. 谭强,沙慧芳,江晓丰,史振余,顾伟勇,周允中. 复旦学报(医学科学版). 2001(03)
本文编号：3523592
本文链接：https://www.wllwen.com/xiyixuelunwen/3523592.html
最近更新
教材专著
