热带假丝酵母菌毒力表型特征及其编码基因表达水平研究

发布时间：2023-04-03 19:28

　　目的：通过一系列实验评价热带假丝酵母菌的毒力活性,划分毒力活性等级,筛选毒力优势克隆群；借助细胞生物学和反转录等研究手段,比较不同毒力活性代表株感染人膀胱上皮细胞时宿主细胞破坏程度及毒力基因表达水平的差异,识别与细胞损伤相关的特异毒力因子。本研究工作的完成有助于筛选毒力优势克隆群,阐明毒力差异的分子基础,为探索热带假丝酵母菌致病机制提供线索,对其流行病学检测、预防和治疗有重要意义。方法：分离自不同感染部位的热带假丝酵母菌经培养制备成相应浓度的新鲜菌悬液后,分别进行毒力表型试验,用OD测定法检测热带假丝酵母菌聚苯乙烯表面的黏附；用结晶紫染色(CV)实验和XTT实验评价热带假丝酵母菌聚苯乙烯表面生物膜形成及人膀胱癌上皮细胞(TCC-SUP)表面的黏附和生物膜形成；用显微镜评价热带假丝酵母菌在诱导培养基和非诱导培养基中的菌丝形成能力；用含特定酶底物的平板(牛血清蛋白平板、卵黄琼脂平板、Tween 80不透明琼脂板、三丁酸甘油酯琼脂平板和羊血平板),通过观察沉淀环和溶血环的形成,分别测定热带假丝酵母菌的天冬氨酰蛋白酶活性、磷脂酶活性、酯酶活性、脂肪酶活性和溶血活性；分析各毒力表型特征间相关关系...

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
缩略词
摘要
ABSTRACT
1 前言
2 不同克隆群热带假丝酵母菌毒力表型特征分析
    2.1 材料
        2.1.1 实验菌株
        2.1.2 主要仪器
        2.1.3 主要试剂
    2.2 实验方法
        2.2.1 聚苯乙烯表面黏附和生物膜形成
        2.2.2 膀胱癌上皮细胞表面黏附和生物膜形成
        2.2.3 分泌水解酶
        2.2.4 多位点序列分型(MLST)分析
        2.2.5 统计学分析
    2.3 实验结果
        2.3.1 热带假丝酵母菌黏附
        2.3.2 热带假丝酵母菌生物膜形成
        2.3.3 热带假丝酵母菌水解酶活性
        2.3.4 热带假丝酵母菌各毒力表型特征相关分析
        2.3.5 不同克隆群热带假丝酵母菌毒力表型特征比较
        2.3.6 不同感染部位间热带假丝酵母菌毒力表型特征比较
    2.4 讨论
3 不同毒力活性热带假丝酵母菌毒力基因表达解析
    3.1 材料
        3.1.1 实验菌株
        3.1.2 主要仪器
        3.1.3 主要试剂
    3.2 实验方法
        3.2.1 脂酶活性、脂肪酶活性和菌丝形成能力评价
        3.2.2 毒力基因表达解析
        3.2.3 热带假丝酵母菌诱导细胞损伤评价
        3.2.4 统计分析
    3.3 实验结果
        3.3.1 酯酶活性和菌丝形成能力
        3.3.2 毒力基因在浮游状态、聚苯乙烯表面和TCC-SUP表面表达水平比较
        3.3.3 毒力基因表达与其表型相关分析
        3.3.4 毒力基因表达和毒力表型特征与细胞破坏程度相关分析
    3.4 讨论
4 结论与展望
    4.1 结论
    4.2 展望
参考文献
综述
    参考文献
附录1 热带假丝酵母菌菌株信息及毒力表型特征分级
攻读硕士学位期间获奖及发表论文情况
致谢



本文编号：3781009