树突状细胞中Rab40b/c相互作用蛋白质的鉴定研究

发布时间：2023-08-11 16:39

　　目的改进串联亲和纯化质谱(TAP-MS)技术,鉴定并验证Rab40b和Rab40c在树突状细胞中的相互作用蛋白质。方法用分子克隆技术构建融合蛋白基因e Xact-6×His-EYFP-Rab40b和e Xact-6×His-EYFP-Rab40c的表达载体,采用慢病毒感染建立融合蛋白e Xact-6×His-EYFP-Rab40b和e Xact-6×His-EYFP-Rab40c稳定表达的树突状细胞系。改进串联亲和纯化技术,通过e Xact-6×His标签进行新型串联亲和纯化和q TOF液质检测,运用Comp PASS算法过滤和GO富集分析,鉴定Rab40b和Rab40c的相互作用蛋白,并采用免疫共沉淀验证。结果成功构建e Xact-6×His-EYFP-Rab40b和e Xact-6×His-EYFP-Rab40c融合蛋白稳定表达的树突状细胞系。采用新型串联亲和纯化方法,鉴定获得26个Rab40b高可信相互作用蛋白和16个Rab40c高可信相互作用蛋白。Rab40b、Rab40c分别与Elongin B、Elongin C、Cullin5具有相互作用。结论成功建立新型串联亲和纯化方法...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1. 1 材料及试剂
    1. 2 方法
        1. 2. 1构建融合蛋白基因e Xact-6 × His-EYFPRab40b和e Xact-6 × His-EYFP-Rab40c的表达载体
        1. 2. 2 构建融合蛋白e Xact-6 × His-EYFP-Rab40b和e Xact-6 × His-EYFP-Rab40 稳定表达的树突状细胞系
        1.2.3串联亲和纯化质谱鉴定Rab40b和Rab40c的相互作用蛋白复合物
        1.2.4免疫共沉淀验证蛋白质相互作用
2 结果
    2. 1 融合蛋白e Xact-6 × His-EYFP-Rab40b和e Xact-6 ×His-EYFP-Rab40c稳定表达的树突状细胞系的构建
    2. 2 串联亲和纯化质谱鉴定Rab40b / c在树突状细胞中的蛋白复合物
    2. 3 Rab40b / c与蛋白复合体相互作用验证
3 讨论



本文编号：3841393