寨卡病毒、登革病毒、黄热病毒及基孔肯雅病毒多重实时荧光qRT-PCR检测方法的研究

发布时间：2023-10-11 22:48

　　寨卡病毒(ZikaVirus,ZIKV),属于黄病毒科(Flaviviridae)黄病毒属,是单股正向RNA病毒。2015年,巴西地区暴发了重大ZIKV疫情,造成数百万人感染,引起了世界各国公共卫生部门的高度关注及警惕。ZIKV病毒感染可能与神经和自身免疫系统并发症有关,如产前小头畸形(PM)和格林-巴利综合征(GBS),给当地带来了严重的疾病负担。此外,由于ZIKV与登革病毒(Dengue virus,DENV)、黄热病毒(Yellow Fever virus,YFV)及基孔肯雅病毒(Chikungunya virus,CHIKV)具有相同的传播媒介,感染后的早期临床症状非常相似,这给疾病的早期诊断带来困难。早期及时的有效诊断有利于尽早辨别感染、控制疾病的发展与流行,因此,针对ZIKV的防控急需建立能区分鉴定这四种病毒的检测试剂。目前ZIKV的诊断方法主要有三种:病毒分离培养、血清学检测及实时荧光定量 RT-PCR(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)。病毒分离培养是病毒检测及鉴别的...

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第一章 前言
    1 寨卡病毒及其流行情况
        1.1 寨卡病毒
        1.2 寨卡病毒的流行病学
        1.3 寨卡、登革、黄热及基孔肯雅病毒鉴别诊断需求
    2 寨卡、登革、黄热及基孔肯雅病毒检测方法
        2.1 病毒分离培养与血清学检测方法
        2.2 分子生物学检测方法
    3 多重实时荧光qRT-PCR
        3.1 基于染料法的多重实时荧光qRT-PCR
        3.2 基于探针法的多重实时荧光qRT-PCR
    4 本文的研究目的、思路及意义
第二章 材料与方法
    1 材料
        1.1 主要仪器
        1.2 菌株和质粒
        1.3 灭活病毒
        1.4 试剂与耗材
        1.5 常用溶液的配制
    2 方法
        2.1 引物及探针的设计
        2.2 核酸模板的制备
        2.3 质粒的构建
        2.4 标准曲线的制作
        2.5 常规实时荧光qRT-PCR方法
        2.6 统计学分析
第三章 结果与分析
    1 单重qRT-PCR体系的筛选与建立
        1.1 ZIKV单重qRT-PCR体系的筛选与建立
        1.2 DENV单重qRT-PCR体系的筛选与建立
        1.3 YFV单重qRT-PCR体系的筛选与建立
        1.4 CHIKV单重qRT-PCR体系的筛选与建立
    2 实时荧光qRT-PCR组合筛选与体系优化
        2.1 实时荧光qRT-PCR组合筛选
        2.2 四重qRT-PCR体系优化
    3 四重qRT-PCR体系评价
        3.1 四重qRT-PCR体系灵敏度评价
        3.2 四重qRT-PCR体系特异性评价
        3.3 四重qRT-PCR体系重复性评价
        3.4 四重qRT-PCR体系重叠感染检测
        3.5 四重qRT-PCR体系对模拟ZIKV标本的检测
第四章 讨论
    1 多重PCR筛选策略
    2 多重PCR引物、探针设计
    3 多重PCR与单重PCR的比较
    4 寨卡、登革、黄热及基孔肯雅四重PCR的优势
第五章 总结与展望
    1 总结
    2 展望
参考文献
在读期间的科研成果
致谢



本文编号：3852942