肽聚糖脱乙酰酶Rv1096对分枝杆菌与宿主细胞相互作用的影响

发布时间：2023-10-21 15:56

　　目的探讨结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis, Mtb)肽聚糖脱乙酰酶Rv1096对分枝杆菌与宿主细胞相互作用的影响。方法利用过表达Rv1096基因的重组耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis, MS)_Rv1096,通过差速离心及胰蛋白酶消化试验,确定Rv1096蛋白的亚细胞定位;通过氨基酸定点突变联合伴刀豆凝集素A(Concanavalin A, ConA)免疫印迹确定Rv1096的O-甘露糖基化位点;运用刃天青显色法检测MS_Rv1096对溶菌酶的抵抗力;通过巨噬细胞感染试验,分析了Rv1096对耻垢分枝杆菌细胞内存活能力和宿主细胞炎症应答的影响。结果确定了Rv1096在重组耻垢分枝杆菌MS_Rv1096中的亚细胞定位在细胞壁;发现Rv1096蛋白含有三个O-甘露糖基修饰位点(²⁶⁵Thr,²⁶⁶Ser,²⁶⁷Ser);细胞外测试结果表明,Rv1096能增强耻垢分枝杆菌对溶菌酶的抵抗能力,最低抑菌质量浓度...

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 细胞、菌株及质粒
    1.2 主要试剂及仪器
    1.3 Rv1096转录水平的检测
    1.4 Rv1096蛋白在MS_Rv1096菌中的亚细胞定位
    1.5 Rv1096的定点突变及O-甘露糖基化位点的检测
    1.6 Rv1096对溶菌酶敏感性的检测
    1.7 THP-1细胞对Rv1096存活影响的检测
    1.8 THP-1细胞中TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10表达水平的检测
    1.9 统计学分析
2 结 果
    2.1 Rv1096转录水平、蛋白表达及亚细胞定位
    2.2 Rv1096的定点突变及O-甘露糖基化位点
    2.3 Rv1096对细菌溶菌酶的敏感性及THP-1细胞对Rv1096存活的影响
    2.4 THP-1细胞TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10表达水平
3 讨 论



本文编号：3856153