PD-L1基因敲除小鼠构建及初步表型验证

发布时间：2023-12-10 17:57

　　目的:程序性死亡配体-1(PD-L1)是免疫调节途径的重要因子,是抗肿瘤免疫疗法中重要的靶标之一。利用CRISPR/Cas9技术成功构建PD-L1基因敲除小鼠模型,并初步分析其表型。方法:构建Cas9和sgRNA载体,并转录获得RNA,通过显微注射方式将RNA注射到C57BL/6小鼠受精卵中,经过鉴定获得F₀代阳性小鼠。F₀代小鼠与野生型C57BL/6小鼠交配获得F₁代杂合子小鼠,再通过F₁代小鼠自交获得F₂代纯合子小鼠品系。随后通过Real-Time PCR和流式实验分别检测PD-L1基因在mRNA和蛋白质水平上的表达情况。结果:Real-Time PCR和流式实验检测结果显示与野生型C57小鼠相比,PD-L1纯合子小鼠的PD-L1 mRNA相对表达水平和细胞上的蛋白质表达均有显著性下降,仅测定到本底的信号,证实已成功构建PD-L1基因敲除小鼠品系,为PD-L1体内基因功能研究提供了新的小鼠模型。

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 伦理声明
    1.2 试剂、材料和动物
        1.2.1 质粒和动物
        1.2.2 主要试剂
    1.3 实验方法
        1.3.1 sgRNA设计和寡聚核苷酸链的合成
        1.3.2 sgRNA表达载体构建
        1.3.3 sgRNA和Cas9表达载体的体外转录
        1.3.4 阳性小鼠品系获得及鉴定
        1.3.5 Real-Time PCR检测
        1.3.6 流式细胞术(FACS)检测淋巴细胞PD-L1表达
2 结果
    2.1 PD-L1基因敲除小鼠获得
    2.2 PD-L1基因敲除小鼠mRNA水平敲除效果检测
    2.3 PD-L1基因敲除小鼠蛋白水平敲除效果验证
3 讨论



本文编号：3872859