恶性疟原虫SURFIN 1.1 蛋白在红内期转运机制的研究

发布时间：2023-11-05 11:35

　　目的:疟疾是经媒介按蚊传播引起的严重威胁人类健康的寄生原虫感染性疾病。全球每年约有2亿700万疟疾病例,60万人死于疟疾感染。疟原虫在人体内可以分为肝期无性增殖和红内期裂体增殖,其中红内期是疟原虫致病并引起感染宿主产生严重临床症状的主要阶段。疟原虫感染红细胞的结构和功能改变可帮助疟原虫逃避宿主免疫系统的清除,并对宿主产生严重致病性和致死性。红细胞结构和功能等一系列变化的产生,源于红内期原虫向宿主红细胞胞浆和感染红细胞膜表面分泌大量原虫蛋白,而原虫蛋白的分泌又有赖于红内期原虫自身建立的独特网状蛋白转运系统。SURFIN是近年研究发现的疟原虫蛋白家族,属于目前尚未阐明转运机制的PNEPs(PEXEL negative exported proteins,PNEPs)蛋白家族。SURFIN蛋白在恶性疟原虫感染红细胞黏附宿主内皮细胞和裂殖子侵袭过程中发挥重要作用。因此,本研究拟选取恶性疟原虫SURFIN_1.1蛋白,通过分子生物学和免疫学相关技术,阐明介导SURFIN_1.1蛋白转运的相关序列,从而为抗疟新药靶位的研发提供理论依据。研究方法:通过生物信息...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
英文缩略语
1 前言
2 材料与方法
    2.1 主要试剂和仪器
        2.1.1 主要试剂
        2.1.2 主要仪器
        2.1.3 载体与虫株
    2.2 主要研究方法
        2.2.1 生物信息学分析
        2.2.2 恶性疟疟原虫基因组DNA(gDNA)的提取
        2.2.3 pSLI-SURFIN1.1
full-2×FKBP-GFP载体构建
        2.2.4 游离型表达载体构建
        2.2.5 恶性疟原虫培养和转染
        2.2.6 SURFIN_1.1 重组蛋白的定位和表达检测
3 结果
    3.1 生物信息学分析
    3.2 融合GFP标签SURFIN_1.1全长蛋白转运至茂式点
        3.2.1 pSLI-SURFIN1.1
full-2×FKBP-GFP载体构建,转染和筛选
        3.2.2 SURFIN1.1
full-GFP重组蛋白定位检测
    3.3 介导SURFIN_1.1转运至茂式点的结构域
        3.3.1 SURFIN_1.1NCVT-Cyt和SURFIN_1.1N-T-Cyt表达载体的构建,转染和筛选
        3.3.2 SURFIN_1.1NCVT-Cyt和SURFIN_1.1N-T-Cyt重组蛋白检测
        3.3.3 重组蛋白在恶性疟原虫红内期的定位检测
    3.4 分析N端、TM和 cyt区域在蛋白转运中的功能
        3.4.1 SURFIN_1.1N-T,SURFIN_1.1N-Cyt,SURFIN_1.1T-Cyt表达载体构建,转染和转染株筛选
        3.4.2 SURFIN_1.1N-T,SURFIN_1.1N-Cyt,SURFIN_1.1T-Cyt重组蛋白检测
        3.4.3 重组蛋白在恶性疟原虫红内期的定位检测
    3.5 SURFIN_1.1蛋白N端转运介导序列分析
        3.5.1 SURFIN_1.1蛋白N端截短表达载体构建,转染和转染株筛选
        3.5.2 N端截短重组蛋白检测
        3.5.3 重组蛋白在恶性疟原虫红内期的定位检测
4 讨论
5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
文献综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简介



本文编号：3860950