外泌体递送miR-101抑制Ⅱ型单纯疱疹病毒和水痘-带状疱疹病毒复制

发布时间：2024-03-05 21:55

　　Ⅱ型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type 2,HSV-2)和水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)同属于α疱疹病毒亚科,都可以引起人类疾病。HSV-2主要导致严重的生殖器疾病,与生理疾病(如生殖器溃疡和炎症)和心理社会问题有关。目前可用的抗病毒药物有一定的局限性,而且尚未研制出可用的疫苗。VZV是引起水痘-带状疱疹的主要病原体。VZV病毒可以神经潜伏,在宿主免疫低下时会重新复发,且会引起带状疱疹后神经痛。感染VZV病毒后的治疗,急需开发新的治疗方法,寻找新的抗病毒机制。miRNA是一种小的非编码RNA分子,可以通过靶向mRNA调控基因表达参与许多细胞过程。病毒感染的宿主细胞可以调节细胞miRNA的表达,通过直接与病毒基因组结合或通过调节先天免疫途径和细胞因子反应抑制病毒复制。例如,miR-101可以通过靶向ATP合酶亚单位(ATP5B)抑制HSV-1复制。miRNA在对抗病毒感染的应用中有巨大的潜能,但由于缺少有效的递送系统,miRNA的应用存在阻碍。外泌体是一种脂质双分子层包被的纳米囊泡,直径约为30-150nm。外泌体...

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
abstract
缩略词表
第一章 前言
    1.1 疱疹病毒
        1.1.1 疱疹病毒
        1.1.2 Ⅱ型单纯疱疹病毒
        1.1.3 水痘带状疱疹病毒
    1.2 miRNA抗病毒
        1.2.1 miRNA简介
        1.2.2 miRNA调节疱疹病毒复制
    1.3 外泌体递送系统
        1.1.1 外泌体概述
        1.1.2 外泌体分泌机制和组成
        1.1.3 外泌体分离与表征
        1.1.4 外泌体作为体内药物递送载体
    1.4 立题依据和创新点
        1.4.1 立体依据
        1.4.2 创新点
    1.5 实验设计
第二章 外泌体负载MIR-101 抑制HSV-2 复制
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞株、病毒株
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要仪器
        2.1.4 引物使用
    2.2 实验方法
        2.2.1 Hela细胞培养
        2.2.2 miR-101 转染细胞试验
        2.2.3 细胞免疫荧光实验
        2.2.4 MTT检测细胞活性
        2.2.5 HSV-2病毒扩增及滴度测定
        2.2.6 qPCR检测细胞中HSV-2 病毒DNA表达量
        2.2.7 蛋白免疫印记法
        2.2.8细胞免疫荧光实验
        2.2.9 差速离心法分离细胞上清液的外泌体
        2.2.10 透射电镜(Transmission electron microscope,TEM)
        2.2.11 外泌体负载miR-101 方法
        2.2.12 RT-PCR检测外泌体中miRNA
        2.2.13 免疫荧光共聚焦
    2.3 实验结果
        2.3.1 miRNA101 抑制HSV-2 病毒复制
        2.3.2 外泌体负载miRNA101
        2.3.3 外泌体递送miRNA101 抑制HSV-2 病毒复制
    2.4 小结
第三章 外泌体递送MIR-101 抑制VZV复制
    3.1 实验材料
        3.1.1 病毒株、细胞株
        3.1.2 试剂和仪器
        3.1.3 引物使用
    3.2 实验方法
    3.3 实验结果
        3.3.1 miR-101 抑制VZV病毒的复制
        3.3.2 MRC5 细胞上清液外泌体表征
        3.3.3 外泌体递送miR-101 抑制VZV病毒复制
    3.4 小结
第四章 讨论
第五章 结论
参考文献
作者简介及科研成果
致谢



本文编号：3920104