日本血吸虫虫卵排泄分泌物中具有诊断价值的抗原分子的初步鉴定

发布时间：2024-03-17 11:33

　　目的鉴定日本血吸虫虫卵分泌排泄物(ESA)中有血吸虫病诊断价值蛋白分子,为建立新的高敏感性和特异性的日本血吸虫病诊断方法奠定基础。方法日本血吸虫尾蚴感染家兔后42d,解剖家兔,取肝脏,匀浆后收集虫卵,置于PBS中,4℃过夜,收集上清,制备虫卵排泄分泌物。以虫卵排泄分泌物包被酶标板,采用ELISA检测不同感染度、不同感染时间小鼠血清抗体滴度。同时以虫卵ESA ELISA分别检测血吸虫病患者血清、健康人血清和弓形虫病患者血清,观察虫卵ESA用于血吸虫病诊断的敏感性和特异性及交叉反应性。通过一维电泳免疫印迹、二维电泳免疫印迹和飞行质谱分析,鉴定虫卵ESA中具有诊断潜能的蛋白分子。结果 ELISA检测结果显示血吸虫感染小鼠血清中抗虫卵ESA抗体IgG水平随着感染时间的延长而升高,且与血吸虫感染度呈正相关,在感染早期即检出相应抗体。虫卵ESA检测血吸虫病患者血清的敏感性为97.2%,检测健康人血清的特异性为95.2%,与弓形虫病患者血清的交叉反应性为25.0%。一维电泳免疫印迹试验显示血吸虫感染兔血清可识别170×10³、150×10³、130×10<...

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【部分图文】：

图1小鼠日本血吸虫感染度与血清抗ESA抗体水平的关系

ELISA检测显示，随着感染尾蚴条数的增加，小鼠血清中抗虫卵ESA抗体滴度逐渐增加。感染尾蚴为5条和10条时，80.0%的小鼠血清抗ESA抗体滴度超过阳性阈值（阳性阈值为阴性值的2.1倍），感染15条及以上100.0%的小鼠血清抗体滴度超过阳性阈值。感染尾蚴为15、20、25、3....

图2日本血吸虫感染时间与小鼠血清抗ESA抗体水平的关系

随着感染时间的延长，血清中抗ESA的抗体滴度逐渐升高，在感染尾蚴20条后2周时，16.7%的小鼠血清抗ESA抗体滴度达到阳性阈值，3、4周时50.0%的小鼠血清中抗ESA的抗体滴度超过阳性阈值，5周时100.0%的小鼠血清抗ESA抗体滴度超过阳性阈值。4、5、6、7、8、10、1....

图3日本血吸虫虫卵ESA、SEAELISA检测血吸虫抗体的敏感性，特异性及交叉反应性比较

以虫卵ESA包被酶标板，采用ELISA检测血吸虫感染者血清、健康人血清和弓形虫病患者血清，同时以虫卵SEA为对照。结果显示虫卵ESAELISA检测血吸虫病人血清的阳性率为97.2%(35/36），健康人血清的阳性率为4.8%(1/21），弓形虫病患者血清的阳性率为25.0%(3....

图4日本血吸虫虫卵排泄分泌物免疫印渍分析

虫卵ESA电泳后转膜，分别用健康兔及血吸虫感染兔血清进行免疫印渍试验。结果显示，感染兔血清可识别虫卵ESA中的170×103、150×103、130×103、100×103、72×103、70×103、30×103左右的蛋白，而这些蛋白不被健康兔血清识别（图4B）。4二维电泳免....

本文编号：3930969