新生牛睾丸支持细胞向多能干细胞的诱导研究
发布时间：2020-12-02 16:03
睾丸支持细胞（Sertoli cells,SCs）是生精上皮中唯一的体细胞,主要为生精细胞提供支持和营养,同时还具有调控精子发生的功能。SCs的分离培养对体外探讨精子发生机理至关重要。目前,人和小鼠SCs的相关研究已取得显著进展,有关猪、牛SCs的分离培养、紧密连接形成及发育、分化相关功能基因克隆及分析等研究已有报道。但因牛新鲜睾丸取材不便、价格昂贵及取材时间不确定等因素,使牛SCs相关研究进展缓慢。为解决以上问题,本研究在前期基础上进一步探讨了从冷冻保存的新生牛睾丸组织中分离纯化SCs的可行性。将冻存的1日龄牛睾丸组织复苏,进行形态学检查和SCs的分离培养。石蜡切片苏木精-伊红（HE）染色显示,曲细精索及睾丸间质保存完好。二步酶消化结果显示,生精上皮解离良好。利用差异贴壁法将原代细胞纯化后扩大培养,绝大多数细胞呈不规则多边形,3 d即可生长至汇合。RT-PCR分析显示,贴壁细胞表达SCs阳性分子标记（Gdnf、Abp）而不表达精原细胞分子标记PLZF。免疫荧光染色显示,贴壁细胞表达SCs的蛋白标记GDNF和ABP。流式细胞术检测显示,所获细胞纯度可达90%以上。上述结果表明,从冻存的...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
牛SCs表面标记检测牛SCs表达ABP、GDNF，且其纯度分别为96.8%和99.7%
图 2.1 四因子病毒包装和感染A. Oct4、Sox2、Klf4、C-myc 四种慢病毒的包装；B. Oct4、Sox2、Klf4、C-myc四种慢病毒侵染牛 SCsFigure 2.1 The packaging and infection of four factors.A. The packaging of Oct4、Sox2、Klf4、C-myc four viruses. B. The infection ofOct4、Sox2、Klf4、C-myc in bovine SCs.2.3.2 不同浓度丝裂霉素处理 MEF 的增殖曲线选用 8 μg/mL、20 μg/mL 的丝裂霉素 C 来处理 MEF 6 h，换新鲜培养基后，第 4 天饲养层细胞的形态（图 2.2A），用 CCK-8 处理饲养层细胞，并对其增殖曲线进行分析（图 2.2 B），由此发现 8 μg/mL 的丝裂霉素 C 较为合适，以不用丝裂霉素 C 处理的 MEF 为对照组。
图 2.2 丝裂霉素 C 的浓度筛选。不同浓度的丝裂霉素 C 处理 MEF 第 4 天的细胞形态观察 B. 不同浓度裂霉素 C 对 MEF 增殖曲线的影响。Fig 2.2 The concentration screening of mitomycin-C.A. Observation of the cell morphology of MEF treated with mitomycin-C adifferent concentrations on day 4. B. The effects of different concentrations mitomycin-C on the proliferation curve of MEF.3 SCs 向 iPSCs 诱导过程中形态学的变化将慢病毒感染的牛 SCs 消化并接种于饲养层上，更换诱导培养基，5 SCs 回缩逐渐变为多边形，更加类似于上皮样细胞形态，逐渐聚集为
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪诱导性多能干细胞技术的研究进展及应用前景[J]. 闫益波,张艳丽,齐巍巍,万永杰,樊懿萱,王锋. 遗传. 2011(04)
本文编号：2895542
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
牛SCs表面标记检测牛SCs表达ABP、GDNF，且其纯度分别为96.8%和99.7%
图 2.1 四因子病毒包装和感染A. Oct4、Sox2、Klf4、C-myc 四种慢病毒的包装；B. Oct4、Sox2、Klf4、C-myc四种慢病毒侵染牛 SCsFigure 2.1 The packaging and infection of four factors.A. The packaging of Oct4、Sox2、Klf4、C-myc four viruses. B. The infection ofOct4、Sox2、Klf4、C-myc in bovine SCs.2.3.2 不同浓度丝裂霉素处理 MEF 的增殖曲线选用 8 μg/mL、20 μg/mL 的丝裂霉素 C 来处理 MEF 6 h，换新鲜培养基后，第 4 天饲养层细胞的形态（图 2.2A），用 CCK-8 处理饲养层细胞，并对其增殖曲线进行分析（图 2.2 B），由此发现 8 μg/mL 的丝裂霉素 C 较为合适，以不用丝裂霉素 C 处理的 MEF 为对照组。
图 2.2 丝裂霉素 C 的浓度筛选。不同浓度的丝裂霉素 C 处理 MEF 第 4 天的细胞形态观察 B. 不同浓度裂霉素 C 对 MEF 增殖曲线的影响。Fig 2.2 The concentration screening of mitomycin-C.A. Observation of the cell morphology of MEF treated with mitomycin-C adifferent concentrations on day 4. B. The effects of different concentrations mitomycin-C on the proliferation curve of MEF.3 SCs 向 iPSCs 诱导过程中形态学的变化将慢病毒感染的牛 SCs 消化并接种于饲养层上，更换诱导培养基，5 SCs 回缩逐渐变为多边形，更加类似于上皮样细胞形态，逐渐聚集为
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪诱导性多能干细胞技术的研究进展及应用前景[J]. 闫益波,张艳丽,齐巍巍,万永杰,樊懿萱,王锋. 遗传. 2011(04)
本文编号：2895542
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