过表达Sox2对牛胎儿成纤维细胞重编程作用的研究
发布时间：2024-02-15 06:06
Sox2是SOX基因(SRY-related high mobility group box,SOX)家族的一个成员,也是体细胞重编程为多能干细胞的重要转录因子之一。Sox2除了能够维持胚胎干细胞的自发复制、增殖和多能性外,同时也参与神经祖细胞和内胚层等多种细胞的增殖和分化。为了探索Sox2在牛胎儿成纤维细胞重编程过程中的作用,本论文通过在牛胎儿成纤维细胞中过表达Sox2基因,研究其对牛胎儿成纤维细胞重编程过程早期阶段的影响。首先培养原代牛胎儿成纤维细胞,之后通过细胞活力测定、以及成纤维细胞生长曲线和核型分析等方法,确认牛胎儿成纤维细胞可以用于本研究。然后通过PCR分别克隆了牛Sox2基因和Puro基因,将其连接到pGEFP-N2基础载体上,构建得到两种表达载体:pEGFP-N2-Puro、pEGFP-N2-Sox2-T2A-Puro-T2A,这两个表达载体可同时表达GFP和Puro或者Sox2、Puro和GFP,分别用于对照组和实验组。在此基础上,通过电转染的方式将两种载体分别导入牛胎儿成纤维细胞,然后通过嘌呤霉素(Puromycin)药物筛选得到两种稳定转染的细胞。将转入pEGFP...
【文章页数】：101 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 综述
1.1 胚胎干细胞
1.1.1 胚胎干细胞的定义
1.1.2 小鼠胚胎干细胞的研究历史
1.1.3 牛胚胎干细胞的研究进展
1.2 诱导多能性干细胞
1.2.1 诱导多能干细胞概述
1.2.2 体细胞重编程过程中的间质-上皮转化
1.2.3 家畜诱导多能干细胞的研究进展
1.3 Sox2 在胚胎干细胞及诱导多能干细胞中的作用
1.3.1 转录因子Sox2 的结构
1.3.2 Sox2 在胚胎干细胞及早期胚胎发育中的作用
1.3.3 Sox2 在诱导多能干细胞中的作用
1.4 展望
1.5 研究目的与意义
第二章 牛胎儿成纤维细胞的分离与体外培养
2.1 引言
2.2 实验材料与设备
2.2.1 试剂和材料
2.2.2 仪器和设备
2.3 实验方法
2.3.1 牛胎儿成纤维细胞的分离与体外培养
2.3.2 牛胎儿成纤维细胞生物学特性的研究
2.3.3 牛胎儿成纤维细胞对嘌呤霉素耐受性的检测
2.4 实验结果
2.4.1 牛胎儿成纤维细胞体外培养
2.4.2 牛胎儿成纤维细胞生物学特性的研究
2.4.3 牛胎儿成纤维细胞对嘌呤霉素耐受性的检测
2.5 小结
2.6 讨论
第三章 牛Sox2 启动子真核表达载体的构建
3.1 引言
3.2 实验材料与设备
3.2.1 试剂和材料
3.2.2 仪器和设备
3.3 实验方法
3.3.1 Sox2 表达载体构建流程图
3.3.2 真核表达载体pEGFP-N2-Puro的构建
3.3.3 真核表达载体pEGFP-N2-Sox2-T2A-Puro-T2A的构建
3.4 实验结果
3.4.1 克隆Puro基因的结果
3.4.2 构建p GEM-T-Puro-T2A载体的结果及鉴定
3.4.3 构建p EGFP-N2-Puro载体的结果及鉴定
3.4.4 克隆牛Sox2 基因的结果
3.4.5 构建p GEM-T-Sox2-T2A的结果及鉴定
3.4.6 真核表达型重组质粒pEGFP-N2-Sox2-T2A-Puro-T2A的构建结果及鉴定
3.5 小结
3.6 讨论
第四章 过表达Sox2 对牛胎儿成纤维细胞重编程作用的研究
4.1 引言
4.2 实验材料与设备
4.2.1 试剂和材料
4.2.2 仪器和设备
4.3 实验方法
4.3.1 牛胎儿成纤维细胞的外源基因转染
4.3.2 阳性细胞筛选
4.3.3 牛胎儿成纤维细胞的诱导
4.3.4 诱导牛胎儿成纤维细胞重编程过程中的生物学分析
4.3.5 统计学分析
4.4 实验结果
4.4.1 电转染牛胎儿成纤维细胞及阳性细胞筛选结果
4.4.2 诱导牛胎儿成纤维细胞重编程过程的形态图
4.4.3 诱导牛胎儿成纤维细胞重编程过程中的生物学分析结果
4.5 小结
4.6 讨论
结论
参考文献
附录
1 缩略词表
2 重要溶液配制
致谢
本文编号：3899345
【文章页数】：101 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 综述
1.1 胚胎干细胞
1.1.1 胚胎干细胞的定义
1.1.2 小鼠胚胎干细胞的研究历史
1.1.3 牛胚胎干细胞的研究进展
1.2 诱导多能性干细胞
1.2.1 诱导多能干细胞概述
1.2.2 体细胞重编程过程中的间质-上皮转化
1.2.3 家畜诱导多能干细胞的研究进展
1.3 Sox2 在胚胎干细胞及诱导多能干细胞中的作用
1.3.1 转录因子Sox2 的结构
1.3.2 Sox2 在胚胎干细胞及早期胚胎发育中的作用
1.3.3 Sox2 在诱导多能干细胞中的作用
1.4 展望
1.5 研究目的与意义
第二章 牛胎儿成纤维细胞的分离与体外培养
2.1 引言
2.2 实验材料与设备
2.2.1 试剂和材料
2.2.2 仪器和设备
2.3 实验方法
2.3.1 牛胎儿成纤维细胞的分离与体外培养
2.3.2 牛胎儿成纤维细胞生物学特性的研究
2.3.3 牛胎儿成纤维细胞对嘌呤霉素耐受性的检测
2.4 实验结果
2.4.1 牛胎儿成纤维细胞体外培养
2.4.2 牛胎儿成纤维细胞生物学特性的研究
2.4.3 牛胎儿成纤维细胞对嘌呤霉素耐受性的检测
2.5 小结
2.6 讨论
第三章 牛Sox2 启动子真核表达载体的构建
3.1 引言
3.2 实验材料与设备
3.2.1 试剂和材料
3.2.2 仪器和设备
3.3 实验方法
3.3.1 Sox2 表达载体构建流程图
3.3.2 真核表达载体pEGFP-N2-Puro的构建
3.3.3 真核表达载体pEGFP-N2-Sox2-T2A-Puro-T2A的构建
3.4 实验结果
3.4.1 克隆Puro基因的结果
3.4.2 构建p GEM-T-Puro-T2A载体的结果及鉴定
3.4.3 构建p EGFP-N2-Puro载体的结果及鉴定
3.4.4 克隆牛Sox2 基因的结果
3.4.5 构建p GEM-T-Sox2-T2A的结果及鉴定
3.4.6 真核表达型重组质粒pEGFP-N2-Sox2-T2A-Puro-T2A的构建结果及鉴定
3.5 小结
3.6 讨论
第四章 过表达Sox2 对牛胎儿成纤维细胞重编程作用的研究
4.1 引言
4.2 实验材料与设备
4.2.1 试剂和材料
4.2.2 仪器和设备
4.3 实验方法
4.3.1 牛胎儿成纤维细胞的外源基因转染
4.3.2 阳性细胞筛选
4.3.3 牛胎儿成纤维细胞的诱导
4.3.4 诱导牛胎儿成纤维细胞重编程过程中的生物学分析
4.3.5 统计学分析
4.4 实验结果
4.4.1 电转染牛胎儿成纤维细胞及阳性细胞筛选结果
4.4.2 诱导牛胎儿成纤维细胞重编程过程的形态图
4.4.3 诱导牛胎儿成纤维细胞重编程过程中的生物学分析结果
4.5 小结
4.6 讨论
结论
参考文献
附录
1 缩略词表
2 重要溶液配制
致谢
本文编号：3899345
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3899345.html
最近更新
教材专著