鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体双重PCR检测方法的建立

发布时间：2024-02-15 08:44

　　为建立一种能同时检测鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体的双重PCR方法,根据MG gapA基因和MS vlhA基因设计合成特异性引物,通过对双重PCR扩增条件的优化,建立能够同时检测MG和MS的双重PCR方法。结果显示,双重PCR反应条件中最适退火温度为58℃,反应体系中最适模板浓度为5.76ng/μL,最适引物量为1.25μL(10mmol/L)。特异性试验显示,所建PCR方法对MG、MS、MG/MS混合培养物均可扩增出相应的特异性条带,而对AIV疫苗、NDV疫苗、MO、E.coli、SE的基因组扩增结果均为阴性;敏感性试验显示,该方法对MS、MG最低检出核酸终浓度分别为0.045ng/μL和0.09ng/μL;临床应用性试验显示,所建立的双重PCR方法可同时有效地检测出MG和MS核酸。结果表明,该双重PCR具有良好的特异性、敏感性、临床应用性,可以用于临床病料中MG和MS的快速检测,为MG和MS感染的诊断和流行病学监测提供了一种简便适用的方法。

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【部分图文】：

图3双重PCR扩增结果

图2MS单项PCR扩增结果2.3双重PCR反应条件优化结果

图1MG单项PCR扩增结果

应用MGP1/P2、MSP3/P4引物分别建立单项PCR体系对MG、MS、MG/MS混合物进行扩增，结果见图1和图2。由图1可见，MGP1/P2引物对MG、MG/MS混合物均可扩增出372bp的特异性条带，条带大小与预期相符，而对MS、阴性对照未扩增出任何条带。由图2可见，MS....

图2MS单项PCR扩增结果

应用MGP1/P2、MSP3/P4引物建立双重PCR体系对MG、MS、MG/MS混合物进行扩增，结果见图3。由图3可见，在阴性对照成立条件下，P1、P2、P3、P4混合引物对MG扩增出372bp特异性条带，对MS扩增出1046bp特异性条带，对MG/MS混合物可同时扩增出372....

图4双重PCR温度优化结果

基于双重PCR初体系对双重PCR的的反应条件进行优化，结果见图4、图5和图6。由图4可见，双重PCR退火温度为58℃，由图5可见泳道4、5扩增条带一致，所以选择模板终浓度为5.76ng/μL；由图6可见，引物P1、P2、P3、P4(10mmol/L）用量均为1.25μL。图5双....

本文编号：3899485