下调SUV39H1/2基因表达对水牛乳腺上皮细胞增殖及STAT5a基因表达的影响初步研究

发布时间：2024-02-16 06:36

　　乳腺作为一种与哺乳动物繁殖周期密切相关的重要第二性征器官,其发育和泌乳受多重因素的调控,其中乳腺特异性转录因子STAT5a在调控乳腺发育及泌乳过程中有重要作用。有研究表明,催化组蛋白3第9位赖氨酸三甲基化(H3K9me3)的特异性组蛋白甲基化转移酶SUV39H1/2与染色质浓缩和基因表达调控等密切相关。为了解SUV39H1/2基因在乳腺发育和泌乳过程中的作用,本研究拟采用RNA干扰技术探讨SUV39H1/2基因表达下调对水牛乳腺上皮细胞增殖、乳腺发育及STAT5a等泌乳相关基因表达的影响,以阐明H3K9me3在调控水牛乳腺发育及泌乳方面的作用。研究取得如下结果。1.5UV39H1/2对水牛乳腺上皮细胞增殖以及泌乳相关基因表达的影响首先利用293T细胞包装获得SUV39H1/2-shRNA慢病毒,通过慢病毒感染水牛乳腺上皮细胞,观察其对细胞增殖的影响。结果发现,与未感染组相比,SUV39H1/2基因表达下调可以促进乳腺上皮细胞的增殖;流式细胞仪检测细胞周期时发现,实验组细胞周期阻滞在S期,G0/G1期细胞比例无显著差异,G2期比例显著减少(P<0.05)。qRT-PCR结果显示,5...

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２－１?ｐＳｉｃｏ－ＧＦＰ载体骨架??Ｆｉｇ２－１?Ｖｅｃｔｏｒ?Ｂａｃｋｂｏｎｅ?ｏｆ?ｐＳｉｃｏ－ＧＦＰ??２－１?ＳＣ／Ｆ３９／／／／２ｓｈＲＮＡ

菌株：大肠杆菌Ｅ．ｃｏｌｉ?ＤＨ５广购自全式金生物科技有限公司。??质粒：基因表达的载体及基因克隆载体购自ＴａＫａＲａ公司。ｐＳｉｃｏ－ＧＦＰ的慢??病毒表达载体骨架图谱见（图２－１），广西本地水牛■ＳＣ／Ｆ３９／／７／２基因的ｓｈＲＮＡ??序列采用林浪，代小丽等人发表的文章［５....

图２－２质粒转染２９３Ｔ细胞荧光检测结果（４８ｈ?１００ｘ）??Ｆｉｇ．２－２?Ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｖｉｒｕｓ?ｐａｃｋｉｎｇ?ｕｎｄｅｒ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ?ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ（４８ｈ）??

８０００ｂｐ?＾？＾一??图２－１病毒包装质粒酶切鉴定??Ｆｉｇ．?３－１?Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ?ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｖｅｃｔｏｒｓ?ｕｓｅｄ?ｉｎ?ｖｉｒｕｓ?ｐａｃｋｉｎｇ??Ｍｌ?：Ｓｕｐｅｒｃｏｉｌｅｄ?ｍａｒｋｅｒ?Ｍ２：?ｍａｒｋｅｒ?....

图２－３?２９３Ｔ细胞病毒滴度测定（４８ｈ?１０〇ｘ）??Ｆｉｇ．２－３?Ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?Ｖｉｒａｌ?ｔｉｔｅｒ?ａｓｓａｙ?ｆｏｒ?２９３Ｔ?ｃｅｌｌ?（４８ｈ?１０〇ｘ）??

并且荧光强度逐渐增强。ＭＯＩ值为８００和１０００时，细胞生长未受到影响，??当ＭＯＩ值为１４００时，水牛乳腺上细胞空腔增多，培养基中死细胞数增多。因此??采用ＭＯＩ值为１０００的病毒浓度进行后续实验（图２－４）。??＿關??图２－４不同ＭＯＩ值病毒感染水牛乳腺上皮细胞??Ｆｉｇ．....

图３－２?启动子ＰＣＲ扩增结果??Ｆｉｇ．３－２?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ＳＴＡＴ５ａ?ｐｒｏｍｏｔｅｒ??－

序列对比显示：克隆获得水牛启动子区域，与ＵＣＳＣ数据库中的??基因上游２０００?ＢＰ启动子区序列同源性达９９％。??■??图３－２?启动子ＰＣＲ扩增结果??Ｆｉｇ．３－２?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ＳＴＡＴ５ａ?ｐｒｏｍｏｔｅｒ??注：Ｍ：?Ｍａｒｋ....

本文编号：3900995