洛克沙胂完全抗原的制备及其单克隆抗体的研制

发布时间：2024-02-21 05:52

　　洛克沙胂(Roxarsone,ROX)是有机砷制剂的一种,由于它具有抗球虫,促进生长等作用,被广泛应用于畜禽养殖中。但随着科学技术的发展,人们逐渐意识到了ROX带来的不良影响,欧盟、美国、中国都相继禁止ROX的使用或者规定了ROX的最低检测限,因此必须建立ROX的快速检测方法。目前检测ROX最常用的方法仍是仪器检测法,包括色谱法和质谱法等,但这些方法需要昂贵的仪器设备,且需专业人员进行操作;而免疫学快速检测方法具有快速,特异,且能大批量检测样品的特点,对ROX的现场快速筛查具有重要的意义。优质的抗体是建立免疫学快速检测方法的关键,目前针对ROX的免疫学快速检测方法主要是以多克隆抗体作为检测抗体,尚未有ROX单克隆抗体检测产品的相关报导。本研究旨在研制出高特异性、高灵敏度的抗体,为建立ROX免疫学快速检测方法打下基础。本研究以ROX的结构类似物3-氨基-4-羟基苯胂酸(HAPA)作为ROX的替代物,用碳二亚胺(EDC)将BSA与HAPA通过酰胺键相连,制备人工合成抗原HAPA-BSA;用戊二醛将OVA与HAPA的伯氨基相连,制备用于检验的包被抗原HAPA-OVA。用紫外扫描、SDS-PA...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图12HAI叭结构式

的特征基团，因此选择偶联方法时要尽量避免对砷酸基团的破羟基是首选的活性基团，但对苯环上羟基进行改造的同时，可能的羟基基团遭到破坏，最终导致ROX的特有结构被破坏，使得完体后不能产生针对ROX的抗体。因此通过改造苯环上亚硝基，使就成为了一种行之有效的改造方案。半抗原的氨基与....

图1.3HAPA-BSA合成示意图

.4.2偶联方法的选择.4.2.1碳化二亚胺(EDC)法BSA、OVA上的常用活性基团为氨基和羧基，EDC带有N=C=N官能团，基团可以使氨基和羧基在一定条件下脱去一分子的水，从而生成酰胺键。将体蛋白BSA溶于PBS后，使其充分溶解，加入一定量的EDC活化....

图1.4HAPA-OVA合成示意图

.5完全抗原的鉴定合成的完全抗原需要进行相应的鉴定，以判断半抗原是否与载体蛋白偶联功。常用的鉴定方法有质谱法，核磁共振法，SDS-PAGE鉴定分子量的方法及紫外扫描测定最大吸收峰的方法。其中前两种鉴定方法准确度高，但所需的仪器精密、昂贵。后两种方法常用，且操作方法简单，并且鉴....

图2.1标准蛋白曲线

原浓度测定据进行处理，以595nm处吸光值为纵坐标，标准曲线，并得出标准方程。将待测样品的OD450nm浓度，并取其平均值，即为样品的蛋白浓度，HA，同理测得HAPA-OVA的浓度为0.596mg/mL。1.1481.4361.7381.990g）00....

本文编号：3905132