动物衣原体病通用LAMP方法的建立
发布时间：2024-02-26 21:02
动物衣原体病是由各类衣原体感染哺乳动物、禽类和人所引起的一类疾病的总称。因该类疾病对养殖业的健康发展、动物产品进出口贸易和人类健康等公共卫生领域易造成巨大的经济损失,故而对该类疾病的研究越发受到相关部门和国内外学者的重视。传统衣原体诊断方法存在检测时间长、对操作人员和仪器设备要求高、检测灵敏度有限以及检测衣原体种类范围有限而导致漏检的不足,故亟需建立一种快速准确的衣原体诊断方法。 本研究采用新型核酸扩增技术,即环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP)技术,建立衣原体通用检测方法。根据LAMP反应原理,针对衣原体共有特定的保守区域设计通用的2对基因的内、外引物和1对环引物。使用LAMP Real Time Turbidimeter LA-320仪对反应进程中的浊度实时监控,对影响LAMP反应效率的重要参数(反应温度和内引物浓度)进行优化,确定本方法的最佳反应体系和反应条件。通过特异性试验和灵敏度试验对本方法的特异性和灵敏度进行探索；利用同一批次和不同批次提取的标准株沙眼衣原体DNA验证本方法的重复性和稳定性；添加特殊的染料...
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
缩略词表
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1.1 衣原体概况
1.1.1 生物学特性
1.1.1.1 形态结构与生长周期
1.1.1.2 培养特性
1.1.1.3 抗原和感染机制
1.1.1.4 抵抗力
1.1.2 衣原体流行病学特点
1.1.3 衣原体病理学研究进展
1.1.4 衣原体基因组的研究
1.1.5 衣原体蛋白组学的研究
1.2 衣原体诊断技术研究进展
1.3 环介导等温扩增技术
1.3.1 引物设计
1.3.2 LAMP反应原理
1.3.3 LAMP方法特点
1.3.4 环介导等温扩增技术的应用
1.3.5 LAMP方法与其他方法的联合应用
1.4 研究目的及意义
第二章 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 试验毒株
2.1.2 主要仪器设备与试剂
2.2 方法
2.2.1 衣原体序列分析及LAMP引物设计
2.2.2 衣原体的增殖培养
2.2.3 衣原体基因组提取及其基因组的鉴定
2.2.4 衣原体通用LAMP检测体系的建立及优化
2.2.4.1 引物验证
2.2.4.2 温度优化
2.2.4.3 内引物优化
2.2.5 LAMP特异性试验
2.2.6 LAMP灵敏度试验
2.2.7 重复性和稳定性试验
2.2.8 LAMP目测法的建立
2.2.8.1 目测法特异性验证
2.2.8.2 目测法灵敏度试验
2.2.9 与其他四种分子生物学方法比较试验
2.2.9.1 五种检测方法特异性及衣原体检测范围的比较
2.2.9.2 LAMP方法的敏感度与3种PCR检测方法进行比较
2.2.9.3 LAMP方法及3种PCR方法用于临床样本检测的比较
第三章 试验结果
3.1 衣原体基因组序列分析及LAMP引物设计
3.2 衣原体基因组的鉴定
3.3 衣原体通用LAMP检测体系的建立及优化
3.3.1 引物验证
3.3.2 温度优化
3.3.3 内引物浓度优化
3.4 LAMP特异性试验
3.5 LAMP灵敏度试验
3.6 LAMP重复性和稳定性试验
3.7 衣原体LAMP目测法的建立及与LA-320C仪器检测结果比较
3.7.1 目测法特异性试验
3.7.2 目测法灵敏度试验
3.8 衣原体通用LAMP检测方法与文献报道的4种分子生物学方法比较试验
3.8.1 LAMP及4种PCR方法特异性比较试验
3.8.2 LAMP与3种PCR检测方法灵敏度比较试验
3.8.3 应用于临床检测的比较
第四章 讨论
4.1 衣原体通用LAMP检测方法的建立
4.2 衣原体通用LAMP目测法的建立
4.3 通用LAMP方法与4种其他学检测方法的比较
4.4 方法的进一步完善
4.5 后续工作建议
4.6 展望
第五章 结论
参考文献
致谢
攻读硕士期间发表文章、参与的科研项目情况
本文编号：3911851
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
缩略词表
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1.1 衣原体概况
1.1.1 生物学特性
1.1.1.1 形态结构与生长周期
1.1.1.2 培养特性
1.1.1.3 抗原和感染机制
1.1.1.4 抵抗力
1.1.2 衣原体流行病学特点
1.1.3 衣原体病理学研究进展
1.1.4 衣原体基因组的研究
1.1.5 衣原体蛋白组学的研究
1.2 衣原体诊断技术研究进展
1.3 环介导等温扩增技术
1.3.1 引物设计
1.3.2 LAMP反应原理
1.3.3 LAMP方法特点
1.3.4 环介导等温扩增技术的应用
1.3.5 LAMP方法与其他方法的联合应用
1.4 研究目的及意义
第二章 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 试验毒株
2.1.2 主要仪器设备与试剂
2.2 方法
2.2.1 衣原体序列分析及LAMP引物设计
2.2.2 衣原体的增殖培养
2.2.3 衣原体基因组提取及其基因组的鉴定
2.2.4 衣原体通用LAMP检测体系的建立及优化
2.2.4.1 引物验证
2.2.4.2 温度优化
2.2.4.3 内引物优化
2.2.5 LAMP特异性试验
2.2.6 LAMP灵敏度试验
2.2.7 重复性和稳定性试验
2.2.8 LAMP目测法的建立
2.2.8.1 目测法特异性验证
2.2.8.2 目测法灵敏度试验
2.2.9 与其他四种分子生物学方法比较试验
2.2.9.1 五种检测方法特异性及衣原体检测范围的比较
2.2.9.2 LAMP方法的敏感度与3种PCR检测方法进行比较
2.2.9.3 LAMP方法及3种PCR方法用于临床样本检测的比较
第三章 试验结果
3.1 衣原体基因组序列分析及LAMP引物设计
3.2 衣原体基因组的鉴定
3.3 衣原体通用LAMP检测体系的建立及优化
3.3.1 引物验证
3.3.2 温度优化
3.3.3 内引物浓度优化
3.4 LAMP特异性试验
3.5 LAMP灵敏度试验
3.6 LAMP重复性和稳定性试验
3.7 衣原体LAMP目测法的建立及与LA-320C仪器检测结果比较
3.7.1 目测法特异性试验
3.7.2 目测法灵敏度试验
3.8 衣原体通用LAMP检测方法与文献报道的4种分子生物学方法比较试验
3.8.1 LAMP及4种PCR方法特异性比较试验
3.8.2 LAMP与3种PCR检测方法灵敏度比较试验
3.8.3 应用于临床检测的比较
第四章 讨论
4.1 衣原体通用LAMP检测方法的建立
4.2 衣原体通用LAMP目测法的建立
4.3 通用LAMP方法与4种其他学检测方法的比较
4.4 方法的进一步完善
4.5 后续工作建议
4.6 展望
第五章 结论
参考文献
致谢
攻读硕士期间发表文章、参与的科研项目情况
本文编号：3911851
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3911851.html
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