中国荷斯坦公牛SPEF2基因表达与精液品质的相关性分析

发布时间：2024-02-28 19:57

　　随着牛人工授精技术的广泛推广,种公牛对奶牛群体遗传进展贡献达70%以上,使得高质量的精液品质与经济效益直接相关。正常的精子鞭毛对于精子运动和受精能力必不可少,它涉及到多个具有细胞时空特异性的基因协同表达。因此,鉴定新生公牛与成年公牛睾丸中特异表达的基因及其分子调控机理对于阐明睾丸发育及精子发生的机理至关重要。已有研究表明,SPEF2(Sperm flagella 2.)基因与精子鞭毛的正常发育和男性生殖力密切相关。本试验通过研究SPEF2基因在中国荷斯坦公牛睾丸、附睾和精子中表达,功能性SNPs的鉴定及启动子区甲基化水平分析,以增加对SPEF2基因表达调控机理及其与公牛精液品质的关系的了解,丰富对公牛高繁殖性状形成的分子机理的认识。一中国荷斯坦公牛SPEF2基因可变剪接体鉴定利用RT-PCR、克隆测序在公牛睾丸组织中检测到4种新的SPEF2可变剪接体,分别命名为SPEF2-SV1、SPEF2、SV2、SPEF2-SV3和SPEF2-SV4。Western blot技术检测到SPEF2蛋白在新生公牛和成年公牛心、肝、脾、肺、肾和睾丸组织的表达。IHC揭示了SPEF2蛋白在睾丸的初级精母细...

【文章页数】：90 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
英文缩写
第一部分 文献综述
    第一章 中国荷斯坦公牛精液品质研究现状
        1 研究种公牛高繁殖性状形成分子机理的重要性
        2 种公牛精液品质相关指标
        3 影响种公牛精液品质的因素
        4 公牛育种中候选基因法的应用
        5 SPEF2基因研究进展
    第二章 基因选择性剪接和表观遗传修饰在雄性繁殖中的作用
        1 可变剪接
            1.1 可变剪接的常见模式
            1.2 可变剪接的调控
            1.3 可变剪接与雄性繁殖
        2 表观遗传修饰
            2.1 表观遗传学
            2.2 基因表达调控的表观遗传机制
            2.3 生殖细胞发育过程中的表观遗传调控
            2.4 DNA甲基化与雄性不育
        3 研究目的及意义
    参考文献
第二部分 实验研究
    第一章 中国荷斯坦公牛SPEF2基因可变剪接体分析
        1 材料与方法
            1.1 试验材料
            1.2 试验方法
        2 结果与分析
            2.1 公牛各组织总RNA提取
            2.2 牛SPEF2基因编码区克隆及可变剪切体的鉴定
            2.3 牛SPEF2基因在公牛组织及精子中的表达分析
            2.4 牛SPEF2基因可变剪接体生物信息学分析
            2.5 牛SPEF2基因蛋白表达及定位
            2.6 牛SPEF2-SV1转录本在精子中的相对表达
        3 讨论
        4 小结
    第二章 与SPEF2基因可变剪接体相关的SNPs鉴定
        1 材料与方法
            1.1 试验材料
            1.2 试验方法
        2 结果与分析
            2.1 功能性SNP的鉴定
            2.2 SNPs与可变剪接体的关系
            2.3 牛SPEF2基因SNPs分型及遗传分析
            2.4 牛SPEF2基因SNPs与公牛精液品质的相关性分析
        3 讨论
            3.1 F-SNPs与可变剪接的关系
            3.2 牛SPEF2基因多态性与公牛精液品质相关性
        4 小结
    第三章 中国荷斯坦公牛SPEF2基因启动子区甲基化研究
        1 材料与方法
            1.1 试验材料
            1.2 试验方法
        2 结果与分析
            2.1 牛SPEF2基因启动子生物信息学分析
            2.2 牛SPEF2基因5’侧翼区启动子克隆分析
            2.3 启动子真核表达载体的构建
            2.4 牛SPEF2基因启动子活性分析
            2.5 牛SPEF2基因5’侧翼区启动子区甲基化分析
        3 讨论
            3.1 启动子活性与甲基化水平分析
            3.2 公牛精液中SPEF2基因5’侧翼区启动子低甲基化状态与精液品质的相关性
        4 小结
    参考文献
全文结论
全文创新点
致谢
攻读硕士学位期间发表的论文
附录



本文编号：3913946