猪伪狂犬病毒gE基因亚克

发布时间：2024-03-03 14:37

　　猪伪狂犬病（porcine Pseudorabies, PR）是由猪疱疹病毒Ⅰ型(pseudorabiesvirus,PRV)引起猪的一种急性传染病。该病已在世界范围内广泛流行，给养猪业造成了巨大的经济损失。结合相应的鉴别诊断方法，并采取相应的控制措施是预防该病的有效手段。gE糖蛋白是其主要的毒力因子之一，gE基因的缺失可以使PRV毒力大大降低，但不影响其免疫原性。目前gE基因缺失弱毒株已经在世界各国广泛使用。由于缺失疫苗与野毒株之间在gE基因上的差别，因此，gE基因可以区分疫苗免疫和野毒感染。本研究克隆表达了gE的主要抗原表位区，并将其作为包被抗原，建立了快速检测猪伪狂犬病的血清学诊断方法。 根据GenBank中已发表的猪伪狂犬病毒gE全基因序列，设计合成一对特异性引物，采用PCR技术扩增gE全基因，克隆后进行序列测定，测序正确的质粒命名为PRV-gE。根据gE糖蛋白及原核表达载体pET32a的特点，选取一段抗原性较高的序列用Primer5.0软件设计另一对特异性引物。从重组质粒PRV-gE中扩增gE基因抗原性较高的序列（gE，），将其与原核表达载体pET32a连接，构建表达质粒pE...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1PRV-gE全基因的PCR扩增100bpM.DNA标准DL5000；1.酶切产物M.DNAMarkerDL5000；1.productsofenzymedigestion

伪狂犬病毒gE基因亚克隆、原核表达及ELISA抗体检测方法的建立3结果与分析全基因扩增及鉴定全基因扩增及酶切鉴定因组DNA后用gE全基因引物p1、p2进行PCR扩增，获得了与预期大小相异性目的条带（图1）。gE基因克隆至pMD19-T载体后，....

图5pMD-gE，基因的PCR鉴定M.DNA标准DL5000；1.酶切产物M.DNAMarkerDL5000；1.productsofenzymedigestion100bp

gE优势抗原表位的克隆及原核表达gE优势抗原表位的扩增及克隆蛋白的主要抗原表位区选取抗原性较高的750bp基因进行PCR扩增D19-T载体，用限制性内切酶BamHI和HindIII对重组质粒进行双相符的约750bp（目的片段）和2692bp（载....

图4猪伪狂犬病毒gE基因系统进化树

.1.2PRVgE优势抗原表位的克隆及原核表达.1.2.1PRVgE优势抗原表位的扩增及克隆根据gE蛋白的主要抗原表位区选取抗原性较高的750bp基因进行PCR克隆至pMD19-T载体，用限制性内切酶BamHI和HindIII对重组质粒进行预期....

图3猪伪狂犬病毒gE蛋白氨基酸序列同源性分析

E优势抗原表位的克隆及原核表达E优势抗原表位的扩增及克隆蛋白的主要抗原表位区选取抗原性较高的750bp基因进行PCR扩增（图图4猪伪狂犬病毒gE基因系统进化树Fig.4PhyleticevolutiontreeofPRV-gEproteang....

本文编号：3917936