LPS联合恩诺沙星致鸡肝细胞损伤模型的建立及复方甘草酸单胺保护机理研究

发布时间：2024-03-05 00:14

　　家禽细菌感染性疾病防治过程中常需使用抗菌药物,而杀菌型抗菌药往往诱导革兰氏阴性菌释放内毒素。内毒素、抗菌药物皆可诱发肝损伤,二者共同刺激致肝损伤的病理演变规律及药物修复机理亟待探明。本文在内毒素、恩诺沙星单独诱发鸡肝细胞损伤基础上,建立内毒素与恩诺沙星联合诱发新型复合式肝细胞损伤模型,并藉此研究其病理发生发展及复方甘草酸单胺的保护作用及机理。主要研究内容和结果如下：1鸡肝细胞分离及原代培养方法的建立采用半原位两步灌流法,对40-50日龄的海蓝公鸡进行肝细胞分离,台盼蓝拒染法计算肝细胞存活率和细胞总数。肝细胞以5×105 cell/ml接种于6孔细胞培养板,每孔3ml,含10%胎牛血清Williams’ medium E培养基中,CO2培养箱培养。观察细胞形态,测定不同培养阶段细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活力。结果显示,肝细胞存活率≥95%,肝细胞产量为(4.1±0.2)×108cell/肝；培养48 h至144h,细胞上清液中LDH活力在低水平下保持稳定,细胞可维持良好的生长状态达7天以上。2 LPS联合恩诺沙星诱导鸡肝细胞损伤体外模型的建立2.1 LPS、恩诺沙星致肝细胞损伤...

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【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
缩略符号
前言
第一章 文献综述
    1 原代肝细胞分离与体外培养
        1.1 肝细胞分离方法
        1.2 肝细胞培养方法
        1.3 肝细胞体外培养影响因素的分析
    2 内毒素致肝损伤机制
        2.1 内毒素对肝脏的直接损伤作用
        2.2 内毒素对肝脏的间接损伤作用
    3 药物性肝损伤机制
        3.1 药物的固有毒性
        3.2 特异体质反应
    4 复方甘草酸单胺药理作用研究进展
        4.1 抗炎作用
        4.2 抗病毒作用
        4.3 抗氧化作用
        4.4 调节细胞色素P450酶系
        4.5 免疫调节作用
    参考文献
第二章 鸡肝细胞分离及原代培养方法的建立
    1 材料与方法
        1.1 试验材料
        1.2 试验方法
    2 结果
        2.1 鸡肝细胞分离结果
        2.2 细胞生长情况
        2.3 细胞培养上清液中的LDH活力测定结果
    3 讨论
    4 小结
    参考文献
第三章 LPS联合恩诺沙星诱导鸡肝细胞损伤体外模型的建立
    1 材料与方法
        1.1 试验材料
        1.2 试验方法
    2 结果
        2.1 LPS诱导肝细胞损伤最佳剂量筛选
        2.2 恩诺沙星诱导肝细胞损伤最佳剂量筛选
        2.3 确定LPS联合恩诺沙星诱导肝细胞损伤模型建立方法
    3 讨论
    4 小节
    参考文献
第四章 复方甘草酸单胺对LPS联合恩诺沙星诱导鸡肝细胞损伤的保护和抗氧化作用
    1 材料和方法
        1.1 试验材料
        1.2 试验方法
    2 结果
        2.1 CAG对LPS联合恩诺沙星损伤鸡原代肝细胞的保护作用
        2.2 CAG对LPS联合恩诺沙星损伤鸡原代肝细胞的抗氧化作用
    3 讨论
    4 小结
    参考文献
第五章 复方甘草酸单胺对LPS联合恩诺沙星诱导鸡肝细胞凋亡损伤的影响
    1 材料和方法
        1.1 试验材料
        1.2 试验方法
    2 结果
        2.1 Annexin V-FITC/PI染法检测细胞凋亡率
        2.2 实时荧光定量PCR结果
    3 讨论
    4 小结
    参考文献
全文结论
致谢



本文编号：3919383