猪附红细胞体病间接ELISA检测方法的建立与初步应用

发布时间：2024-03-10 08:49

　　附红细胞体病(Eperythrozoonis)是由附红细胞体(Eperythrozoon, E)寄生于不同的脊椎动物,包括啮齿类,反刍动物以及猪在内的宿主的骨髓,红细胞表面等处引发的一种人畜共患性疾病。据报道,它可以感染十几种温血动物,并在全球十几个国家发生和流行。猪附红细胞体病临床上的感染猪多数呈慢性感染,通常无明显临床特征而难于做出及时的诊断,致使猪附红细胞体在群内或者群间传播,由于其的免疫抑制性,当猪群发生强烈应激、或者发生其它传染病时,会增加单独发病或与其它疾病并发或继发感染的可能性,使整个猪群的病症复杂化,病情加重、甚至死亡,而造成经济方面的负面影响。 目前,针对猪附红细胞体病的诊断方法主要有血涂片染色镜检法、血清学诊断、分子生物学诊断方法。血涂片等病原镜检诊断方法主观性强,准确性差。分子生物学诊断方法较其它方法更为敏感和准确,但其昂贵、耗时间长且不适用于规模化猪场流行病学监测。血清学诊断方法中酶联免疫吸附试验作为一种高效,快速,特异的诊断方法被广泛应用于此病的流行病学调查以及监测中。本实验利用三种在猪附红细胞体中与红细胞膜粘附有关且具有良好免疫原性的蛋白建立了间接ELISA...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
1 文献综述
    1.1 猪附红细胞体病的诊断方法
        1.1.1 猪附红细胞体病的病原学诊断方法
        1.1.2 免疫学诊断
        1.1.3 分子生物学诊断
    1.2 国内外流行病学调查
2 研究目的与意义
3 材料与方法
    3.1 主要的仪器与设备
    3.2 实验材料
    3.3 主要溶液的配制
        3.3.1 SDS-PAGE缓冲液
        3.3.2 培养基
        3.3.3 ELISA缓冲液
        3.3.4 其它溶液
    3.4 实验方法
        3.4.1 重组蛋白的表达与SDS-PAGE检测
        3.4.2 重组蛋白ELISA检测方法的操作步骤
        3.4.3 MSG1-ELISA操作步骤
        3.4.4 PCR方法检测病原
    3.5 重组蛋白PFK-ELISA、ALD-ELISA、GAPDH-ELISA检测方法的建立
        3.5.1 抗原最佳包被浓度与血清稀释度的确定
        3.5.2 最佳封闭液浓度和最佳封闭时间的确定
        3.5.3 血清最佳作用时间的确定
        3.5.4 酶标二抗的最佳工作浓度和最佳作用时间的确定
        3.5.5 ELISA判定标准的确定
    3.6 PFK-ELISA、ALD-ELISA、GAPDH-ELISA与MSG1-ELISA的比较
    3.7 湖北省及周边地区规模化猪场猪附红细胞体病流行病学调查
4 实验结果
    4.1 PFK、ALD、GAPDH可溶性重组蛋白的提取和纯化
    4.2 重组蛋白PFK-ELISA、ALD-ELISA、GAPDH-ELISA检测方法的建立
        4.2.1 抗原最佳包被浓度与血清稀释度的确定
        4.2.2 最佳封闭液浓度和最佳封闭时间的确定
        4.2.3 血清最佳作用时间的确定
        4.2.4 酶标二抗最佳工作浓度和最佳作用时间的确定
        4.2.5 ELISA判定标准的确定
    4.3 PFK-ELISA、ALD-ELISA、GAPDH-ELISA与MSG1-ELISA的比较
    4.4 湖北省及周边地区规模化猪场猪附红细胞体病流行病学调查
        4.4.1 规模化猪场不同年龄阶段猪的猪附红细胞体病流行病学调查
        4.4.2 规模化猪场不同季节猪附红细胞体病的流行病学调查
5 讨论
    5.1 猪附红细胞体病检测方法的选择
    5.2 流行病学调查结果分析与讨论
6 结论
参考文献
致谢



本文编号：3924542