山羊体细胞重编程及其转分化研究

发布时间：2024-04-12 00:47

　　山羊多能性干细胞包括：山羊胚胎干细胞(Embryonic Stem Cell, ESCs),山羊胚胎生殖细胞(Embryonic Germ Cell, EGCs)和山羊诱导性多能干细胞(Induced Pluripotent Stem cells, iPSc)。由于对山羊体外的培养体系和表观调控因素仍然不清楚,导致山羊ESCs和EGCs的研究仍没有成功建系的报道。而iPS细胞技术的出现,为家畜多能性细胞研究提供了新的途径和可替代的细胞来源。本实验以关中奶山羊为实验模型,通过从体内受精和发育的囊胚中分离出多能性细胞,尝试筛选适合山羊多能性细胞在体外培养的条件；另外,本实验采用山羊胎儿成纤维细胞(Goat Embryonic Fibroblasts, GEF)为供体细胞,通过逆转录病毒携带的Oct4/Sox2/Klf4/c-Myc四个转录因子,对山羊体细胞进行诱导重编程,并且将诱导重编程细胞定向转分化为神经样细胞和卵母细胞样细胞。 主要获得以下结论： 1.山羊多能性细胞培养体系的优化 本实验共超排处理了25只关中奶山羊,总共获得胚胎253枚,其中发育到2-16细胞的胚胎39枚、桑椹胚113...

【文章页数】：81 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
文献综述
    第一章 动物多能干细胞的研究
        1.1 动物胚胎干细胞研究
            1.1.1 小鼠胚胎干细胞的研究
            1.1.2 人类胚胎干细胞的研究
            1.1.3 家畜胚胎干细胞的研究
        1.2 诱导多能性干细胞的研究
            1.2.1 多能性转录调控因子
            1.2.2 受体细胞的选择
            1.2.3 诱导细胞重编程的方法
            1.2.4 多能性细胞的鉴定
        1.3 多能干细胞应用前景
            1.3.1 再生医学与药物筛选
            1.3.2 发育与基因表观遗传调控
            1.3.3 动物转基因克隆与育种
    第二章 体细胞的转分化研究
        2.1 转分化的研究进展
        2.2 转分化的分类
            2.2.1 成体干细胞转分化
            2.2.2 体细胞转分化
        2.3 体细胞转分化的应用前景
试验研究
    第三章 山羊多能干细胞培养条件的筛选与鉴定
        3.1 材料与方法
            3.1.1 实验材料
            3.1.2 实验方法
        3.2 结果
            3.2.1 山羊体内胚胎的获取
            3.2.2 山羊多能干细胞的分离
            3.2.3 培养条件对山羊ICM贴壁和多能性细胞培养的影响
            3.2.4 培养基对山羊多能性细胞分离的影响
            3.2.5 小分子化合物对山羊多能性细胞分离和培养的影响
            3.2.6 传代方法对山羊多能性细胞培养的影响
            3.2.7 山羊多能性细胞的鉴定
        3.3 讨论
        3.4 小结
    第四章 诱导山羊体细胞重编程及其鉴定
        4.1 材料和方法
            4.1.1 试验材料
            4.1.2 试验方法
        4.2 结果
            4.2.1 山羊体细胞的分离与培养
            4.2.2 山羊成纤维细胞(GEF)生长曲线
            4.2.3 山羊GEF细胞的诱导重编程
            4.2.4 逆转录病毒感染效率的测定
            4.2.5 对山羊诱导多能性细胞进行鉴定
        4.3 讨论
        4.4 小结
    第五章 山羊体细胞定向转分化研究
        5.1 材料和方法
            5.1.1 试验材料
            5.1.2 试验方法
        5.2 结果
            5.2.1 对重编程不同时间成纤维细胞特异基因表达的检测
            5.2.2 体细胞转分化为神经样细胞
            5.2.3 对转分化的神经样细胞进行免疫荧光检测
            5.2.4 体细胞转分化为卵母细胞样细胞
            5.2.5 对转分化的卵母细胞样细胞进行核染色
            5.2.6 对获得的卵母细胞样细胞进行显微操作
        5.3 讨论
        5.4 小结
结论
创新点与进一步研究的课题
参考文献
缩略词
致谢
作者简介



本文编号：3951403