羊种布鲁菌Rev.1菌株eryA基因的克隆表达及单抗制备

发布时间：2024-04-17 19:41

　　布鲁菌病是全球重大的人兽共患病,近年来我国布鲁菌病呈上升趋势,给我国经济造成了巨大损失。本研究通过分析羊种布鲁菌Rev.I株的基因结构、功能及作为诊断抗原的可能性,对eryA基因进行生物信息学分析及原核表达和单克隆抗体的制备。结果表明,本试验成功克隆并表达了 eryA基因;经Western-Blot检测,表达蛋白可与标准阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性;生物信息学分析显示,该蛋白没有跨膜区结构,无信号肽,二级结构中α-螺旋比重最大;抗原表位分析显示,该蛋白含有较多的抗原决定簇。用纯化的蛋白免疫小鼠后采取小鼠脾细胞进行融合后筛选出分泌IgG抗体的杂交瘤细胞,经扩大培养后对小鼠进行腹腔注射,收集腹水并纯化,纯化后的抗体经BCA方法测定及SDS-PAGE检测发现得到高纯度的抗体。通过对eryA基因的研究,为布病检测方法的建立奠定基础。

【文章页数】：47 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.0 布鲁菌病
    1.1 布鲁菌病的流行现状
        1.1.1 布鲁菌病世界范围的流行情况
        1.1.2 布鲁菌病在我国的流行情况
    1.2 病原学
    1.3 布鲁菌病的临床症状
    1.4 布鲁菌的致病机制
    1.5 布鲁菌疫苗的现状
    1.6 布鲁菌病的诊断及防控
        1.6.1 布鲁菌的诊断方法
        1.6.2 布鲁菌病的防控
    1.7 布鲁菌相关基因的研究进展
        1.7.1 布鲁菌毒力基因的研究进展
        1.7.2 赤藓糖醇基因(ery)的研究进展
    1.8 单克隆抗体的介绍
    1.9 研究的目的及意义
2 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 菌株与试剂
        2.1.2 主要仪器设备
        2.1.3 溶液配制
    2.2 方法
        2.2.1 eryA蛋白的生物信息学分析
        2.2.2 eryA基因的克隆、表达及蛋白纯化
        2.2.3 杂交瘤细胞的制备及筛选
        2.2.4 单克隆抗体的制备及纯化
3 结果
    3.1 目的蛋白生物信息学分析
    3.2 eryA基因的克隆、表达及纯化
        3.2.1 目的片段扩增及原核质粒构建
        3.2.2 重组蛋白的SDS-PAGE电泳检测
        3.2.3 Western-Blot检测
        3.2.4 蛋白质纯化
    3.3 杂交瘤细胞的筛选与培养
        3.3.1 免疫后效价的测定
        3.3.2 融合后IgG类型阳性杂交瘤细胞株的筛选
    3.4 eryA抗体的纯化
        3.4.1 SDS-PAGE检测结果
        3.4.2 用BCA法测定蛋白含量
4 讨论
5 结论
致谢
参考文献
作者简介



本文编号：3956834