花生四烯酸（AA）对牛卵巢颗粒细胞的作用研究
发布时间：2024-04-21 06:30
卵泡发育是非常复杂的生理过程,除了需要大量的基础营养物质外,还需要激素、生长因子、脂肪酸等多种物质。花生四烯酸(Arachidonic acid,AA)是多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acid,PUFAs)的一种,在卵泡液中,AA约占到卵泡液总脂肪酸的2.5%,但是,AA在卵泡发育过程中的作用还未被深入研究。本研究通过向体外培养的牛卵巢颗粒细胞中添加不同浓度的AA(0.1%DMSO、1、10、50、100、200μM),旨在探讨AA对卵巢颗粒细胞生理功能的影响,拟阐明AA在牛卵巢颗粒细胞中的分子机制,为提高卵泡及卵母细胞发育潜能提供数据支持与理论指导。试验一花生四烯酸对牛卵巢颗粒细胞体外存活的影响添加不同浓度的AA处理体外培养的牛卵巢颗粒细胞,利用CCK-8试剂盒检测细胞活力。研究结果表明,50 AA处理24 h能够显著提高牛卵巢颗粒细胞活力。同时,本试验还对AA处理后的颗粒细胞的细胞核形态、细胞凋亡比例和凋亡相关基因的表达结果进行研究。结果表明,与对照组相比,50μM AA处理组荧光强度弱,较少细胞细胞核表现凋亡形态学改变;流式细胞仪检测结果显示,50μ...
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 卵泡发育研究进展
1.1.1 卵子发生和卵泡形成
1.1.2 影响卵泡发育的因素
1.2 多不饱和脂肪酸在动物繁殖上的研究进展
1.2.1 多不饱和脂肪酸的结构与分类
1.2.2 多不饱和脂肪酸的来源及合成代谢
1.2.3 多不饱和脂肪酸的生物学功能
1.2.4 多不饱和脂肪酸在动物繁殖中的作用
1.3 AA及其在动物繁殖上的研究进展
1.3.1 AA的合成及代谢
1.3.2 AA的生物学功能
1.3.3 AA在动物繁殖中的作用
1.4 本研究的目的和意义
第二章 AA对牛卵巢颗粒细胞体外存活的影响
2.1 材料与方法
2.1.1 主要仪器
2.1.2 主要试验试剂
2.1.3 牛卵巢采集
2.1.4 颗粒细胞采集与体外培养
2.1.5 颗粒细胞活力检测
2.1.6 RNA提取与qRT-PCR
2.1.7 Hoechst33258 染色检测细胞核形态
2.1.8 Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率
2.1.9 数据统计
2.2 结果与分析
2.2.1 AA对牛卵巢颗粒细胞活力的影响
2.2.2 AA对颗粒细胞细胞核形态的影响
2.2.3 AA对颗粒细胞凋亡的影响
2.2.4 AA调控牛卵巢颗粒细胞凋亡相关基因表达
2.3 讨论
2.4 小结
第三章 AA对牛卵巢颗粒脂滴形成的影响
3.1 材料方法
3.1.1 主要仪器
3.1.2 主要试验试剂
3.1.3 牛卵巢采集
3.1.4 牛卵巢颗粒细胞收集和体外培养
3.1.5 RNA提取与qRT-PCR
3.1.6 油红O染色
3.1.7 数据统计
3.2 结果分析
3.2.1 AA对牛卵巢颗粒细胞形态的影响
3.2.2 AA对牛卵巢颗粒细胞脂滴形成的影响
3.2.3 AA调控牛卵巢颗粒细胞脂肪酸转运相关基因表达
3.3 讨论
3.4 小结
第四章 AA对牛卵巢颗粒细胞作用机制研究
4.1 材料与方法
4.1.1 主要仪器
4.1.2 主要试剂
4.1.3 牛卵巢采集
4.1.4 牛卵巢颗粒细胞收集和体外培养
4.1.5 类固醇激素含量测定
4.1.6 RNA提取与qRT-PCR
4.1.7 牛卵巢颗粒细胞蛋白质提取与Western Blot
4.1.8 数据统计
4.2 结果与分析
4.2.1 AA调控牛卵巢颗粒细胞类固醇激素水平
4.2.2 AA调控牛卵巢颗粒细胞类固醇激素合成相关基因表达
4.2.3 AA对牛卵巢颗粒细胞PI3K和 MAPK信号通路的影响
4.3 讨论
4.4 小结
第五章 结论
5.1 本研究的主要结论
5.2 本研究的创新点
5.3 需要进一步研究的问题
附录
参考文献
致谢
作者简介
本文编号：3960548
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 卵泡发育研究进展
1.1.1 卵子发生和卵泡形成
1.1.2 影响卵泡发育的因素
1.2 多不饱和脂肪酸在动物繁殖上的研究进展
1.2.1 多不饱和脂肪酸的结构与分类
1.2.2 多不饱和脂肪酸的来源及合成代谢
1.2.3 多不饱和脂肪酸的生物学功能
1.2.4 多不饱和脂肪酸在动物繁殖中的作用
1.3 AA及其在动物繁殖上的研究进展
1.3.1 AA的合成及代谢
1.3.2 AA的生物学功能
1.3.3 AA在动物繁殖中的作用
1.4 本研究的目的和意义
第二章 AA对牛卵巢颗粒细胞体外存活的影响
2.1 材料与方法
2.1.1 主要仪器
2.1.2 主要试验试剂
2.1.3 牛卵巢采集
2.1.4 颗粒细胞采集与体外培养
2.1.5 颗粒细胞活力检测
2.1.6 RNA提取与qRT-PCR
2.1.7 Hoechst33258 染色检测细胞核形态
2.1.8 Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率
2.1.9 数据统计
2.2 结果与分析
2.2.1 AA对牛卵巢颗粒细胞活力的影响
2.2.2 AA对颗粒细胞细胞核形态的影响
2.2.3 AA对颗粒细胞凋亡的影响
2.2.4 AA调控牛卵巢颗粒细胞凋亡相关基因表达
2.3 讨论
2.4 小结
第三章 AA对牛卵巢颗粒脂滴形成的影响
3.1 材料方法
3.1.1 主要仪器
3.1.2 主要试验试剂
3.1.3 牛卵巢采集
3.1.4 牛卵巢颗粒细胞收集和体外培养
3.1.5 RNA提取与qRT-PCR
3.1.6 油红O染色
3.1.7 数据统计
3.2 结果分析
3.2.1 AA对牛卵巢颗粒细胞形态的影响
3.2.2 AA对牛卵巢颗粒细胞脂滴形成的影响
3.2.3 AA调控牛卵巢颗粒细胞脂肪酸转运相关基因表达
3.3 讨论
3.4 小结
第四章 AA对牛卵巢颗粒细胞作用机制研究
4.1 材料与方法
4.1.1 主要仪器
4.1.2 主要试剂
4.1.3 牛卵巢采集
4.1.4 牛卵巢颗粒细胞收集和体外培养
4.1.5 类固醇激素含量测定
4.1.6 RNA提取与qRT-PCR
4.1.7 牛卵巢颗粒细胞蛋白质提取与Western Blot
4.1.8 数据统计
4.2 结果与分析
4.2.1 AA调控牛卵巢颗粒细胞类固醇激素水平
4.2.2 AA调控牛卵巢颗粒细胞类固醇激素合成相关基因表达
4.2.3 AA对牛卵巢颗粒细胞PI3K和 MAPK信号通路的影响
4.3 讨论
4.4 小结
第五章 结论
5.1 本研究的主要结论
5.2 本研究的创新点
5.3 需要进一步研究的问题
附录
参考文献
致谢
作者简介
本文编号：3960548
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