鸭细胞因子克隆表达及ELISA检测方法的建立

发布时间：2024-04-21 08:40

　　细胞因子是由细胞分泌的蛋白质,在炎症和免疫应答中发挥着重要作用,主要参与激活和调节其他细胞和组织。目前对哺乳动物细胞因子研究较多,但对禽类细胞因子的作用以及它们相应的蛋白质研究甚少。原因是因为禽类与哺乳动物同源细胞因子的序列相似度很低。随着禽类遗传学和免疫学的新发现,研究者开始探索健康和疾病状态中的细胞因子。樱桃谷鸭作为禽类养殖的重要品种之一,对其细胞因子的研究较少,制约着对其免疫机制的深入研究；同时研究表明,在一些疾病的发生过程中,某些细胞因子的水平会发生明显的变化。因此,本研究对鸭IFN-γ、IL-2、TNF-α基因进行克隆,然后在原核表达系统中进行重组蛋白表达；以此为基础,制备相应的单克隆抗体和多克隆抗体,并初步建立鸭IFN-γ抗原捕获ELISA方法,为研究禽类细胞因子在免疫系统中的作用提供技术支持。 1鸭IFN-γ、IL-2、TNF-α克隆、表达及蛋白纯化 依据GenBank上发表的绿头鸭IFN-γ基因序列、番鸭IL-2基因序列、鸡TNF-α基因序列分别设计特异性引物,提取樱桃谷鸭脾脏淋巴细胞的总RNA,通过RT-PCR和3′RACE和5’RACE技术,成功扩增到鸭的IFN-γ...

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
目录
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1 禽类细胞因子的研究进展
        1.1 细胞因子概述
        1.2 禽类细胞因子基因的克隆
        1.3 细胞因子的分类
    2 细胞因子检测
        2.1 生物学检测方法
        2.2 免疫学检测方法
        2.3 分子生物学检测方法
第二章 鸭IFN-γ、IL-2、TNF-α克隆、表达及蛋白纯化
    摘要
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 结果
        2.1 细胞因子的克隆
        2.2 细胞因子基因的序列分析
        2.3 重组原核表达质粒的构建
        2.4 重组菌的诱导表达产物鉴定与纯化
        2.5 鸭TNF-α基因全长序列测定结果
    3 讨论
    ABSTRACT
第三章 鸭IFN-γ、IL-2、TNF-α的抗体制备
    摘要
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 结果
        2.1 间接ELISA方法的建立
        2.2 阳性杂交瘤细胞株的建立
        2.3 阳性杂交瘤细胞株的稳定检测
        2.4 小鼠腹水单抗效价的测定
        2.5 单克隆抗体的Western blot分析
        2.6 单抗特异性鉴定结果
        2.7 单抗亚型鉴定结果
        2.8 多克隆抗体效价的测定
        2.9 多克隆抗体的鉴定
    3 讨论
    ABSTRACT
第四章 鸭IFN-γ抗原捕获ELISA检测方法的建立
    摘要
    1 材料与方法
        1.1 试验材料
    2 结果
        2.1 抗体的纯化
        2.2 最佳抗体包被浓度的确定
        2.3 最佳单克隆抗体包被时间的确定
        2.4 最佳封闭液的确定
        2.5 最佳封闭时间的确定
        2.6 最佳显色时间的确定
        2.7 最低检出限的确定
    3 讨论
    ABSTRACT
参考文献
全文总结
致谢



本文编号：3960659