鸡传染性贫血病毒VP3蛋白的原核表达及其单克隆抗体的研制

发布时间：2024-05-08 04:40

　　本研究首先利用同源重组一步克隆法将鸡传染性贫血病病毒(CIAV)的VP3基因克隆到pGEX-6P-1原核表达载体上,经IPTG诱导及SDS-PAGE分析成功获得了重组蛋白rGST-VP3的表达。随即以纯化的重组蛋白rGST-VP3免疫Balb/c小鼠,通过脾细胞与SP2/0细胞融合以及间接免疫荧光(IFA)筛选,获得2株稳定分泌CIAV-VP3抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为CIAV-VP3-4D7和CIAV-VP3-4G8;亚型鉴定表明,CIAV-VP3-4D7和CIAV-VP3-4G8均为IgG1;效价测定发现,CIAV-VP3-4D7和CIAV-VP3-4G8的腹水间接免疫荧光效价分别为1:102 400与1:12 800;Western blot进一步证实,CIAV-VP3-4D7和CIAV-VP3-4G8均能识别重组蛋白rGST-VP3。本研究结果为后期研究VP3蛋白在CIAV致病中作用及其诱导凋亡分子机制奠定了坚实的物质基础。

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【部分图文】：

图2诱导表达SDS-PAGE结果

图1重组载体PCR鉴定2.3抗VP3蛋白特异性单克隆抗体筛选及特性

图4纯化的重组蛋白rGST-VP3的Westernblot结果

图3纯化后的重组蛋白rGST-VP3SDS-PAGE结果3讨论

图1重组载体PCR鉴定

将破碎后的重组菌上清和沉淀进行SDS-PAGE分析表明,在35kDa左右出现特异性条带,而且目的条带主要存在于细菌破碎后的上清液中(图2)。Westernblot结果显示,以病毒免疫小鼠血清做一抗,在35kDa左右出现一条条带(图3),与预期结果相符。将诱导表达后细菌进行超....

图3纯化后的重组蛋白rGST-VP3SDS-PAGE结果

以转染pcDNA3.1-VP3的DF-1细胞为抗原,通过IFA方法筛选出了2株与CIAV-VP3反应的阳性杂交瘤细胞株,分别挑取一个单克隆细胞建株命名为CIAV-VP3-4G8和CIAV-VP3-4D7,具体IFA荧光结果如图5所示。将2株阳性杂交瘤细胞连续3次亚克隆,所有单克隆....

本文编号：3967511