猪卵母细胞内脂滴的发育规律分析

发布时间：2024-05-10 06:19

　　脂滴作为能量存储、调节脂质动态平衡及细胞内信号传导的细胞器,在卵母细胞成熟、受精和早期胚胎发育过程中均具有重要的作用。本研究基于猪卵母细胞内脂滴含量丰富的特点进行脂滴定量分析。猪卵母细胞内脂质主要以脂滴的形态存在,为了还原细胞的形态结构,检测脂滴数量、体积、密度和空间的分布情况,我们用Nile Red染液对脂质进行荧光染色后采用平面光密度检测方法和三维重建检测方法对脂滴进行定量。通过方法学比较,我们发现基于激光共聚焦扫描的三维重建检测方法能够更准确地对细胞内的脂滴含量进行定量分析。两种方法的准确性和重复性对比结果显示：(1)准确性：三维重建检测方法能更准确地反映样本脂滴含量变异情况(变异系数C.V.=0.86),而平面光密度检测方法C.V=0.68,三维重建检测方法的准确性更高。(2)重复性：三维重建检测方法统计猪卵母细胞内脂滴体积的ICC为0.995、0.936、0.995,平面光密度检测方法统计猪卵母细胞内脂滴总荧光强度的ICC为0.225、-3.413、0.225。针对同一细胞不同角度的重复观察,三维重建检测方法具有更好的重复性(变异系数C.V=0.07,组内相关系数ICC>...

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
符号说明
1. 文献综述
    1.1 研究背景
    1.2 卵母细胞的研究进展
        1.2.1 卵母细胞的发生
        1.2.2 卵母细胞的发育
        1.2.3 卵母细胞的成熟
        1.2.4 卵母细胞内的脂质
    1.3 细胞内脂滴的研究进展
        1.3.1 脂滴的起源
        1.3.2 脂滴的结构与发育
        1.3.3 脂滴的动态过程
        1.3.4 脂滴的生物学功能
    1.4 细胞内脂滴定量的方法
        1.4.1 平面光密度检测方法
        1.4.2 三维重建检测方法
            1.4.2.1 激光共聚焦显微镜工作原理
            1.4.2.2 计算机三维重建技术
2. 本实验的研究内容与意义
3. 材料与方法
    3.1 试验材料
        3.1.1 实验动物来源
        3.1.2 时间与地点
        3.1.3 主要仪器设备
        3.1.4 实验所需试剂
        3.1.5 常用试剂的配制
    3.2 试验方法
        3.2.1 猪卵母细胞脂滴定量分析
            3.2.1.1 猪卵母细胞的采集
            3.2.1.2 猪卵母细胞特异性荧光染色
            3.2.1.3 不同发育阶段猪卵母细胞的分类标准及样本的选取
            3.2.1.4 激光共聚焦显微镜扫描
        3.2.2 猪卵母细胞脂质相关基因表达量分析
            3.2.2.1 总RNA提取
            3.2.2.2 RNA 反转录
            3.2.2.3 Realtime PCR引物设计
            3.2.2.4 实时荧光定量
    3.3 数据处理方法
4. 结果与分析
    4.1 三维重建检测方法和平面光密度检测方法的检测结果
        4.1.1 三维重建检测方法和平面光密度检测方法对卵母细胞脂滴的定量分析
        4.1.2 三维重建检测方法和平面光密度检测方法脂滴定量准确性的对比结果
        4.1.3 三维重建检测方法和平面光密度检测方法脂滴定量重复性的对比结果
    4.2 三维重建检测方法对不同发育阶段的猪卵母细胞进行脂滴定量结果
        4.2.1 猪与其他物种卵母细胞内脂滴分布情况的对比结果
        4.2.2 不同发育阶段猪卵母细胞内脂滴分布情况
        4.2.3 AF期猪卵母细胞内脂滴的定量结果
        4.2.4 不同发育阶段猪卵母细胞内脂滴定量的结果
        4.2.5 不同发育阶段猪卵母细胞内脂滴的个数与体积
    4.3 RT-PCR检测AF期猪卵母细胞内脂质相关基因的相对表达量
5. 讨论
    5.1 三维重建检测方法和平面光密度检测方法的优缺点
    5.2 猪卵母细胞内脂滴的发育规律
    5.3 AF期猪卵母细胞脂质生成相关基因的表达量
6. 结论
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文目录



本文编号：3968821