miR-144-3p通过靶向FOXO1 3’UTR调节TH表达及神经细胞分化

发布时间：2024-04-25 00:11

　　目的1.ADHD患儿血清差异表达microRNA对FOXO1表达调控的作用。2.ADHD动物模型SHR大鼠PFC中过表达和干扰miR-144-3P后,观察SHR多动样症状的变化以及FOXO1和TH表达水平的改变。3.分析FOXO1在不同分化程度细胞中表达水平的差异,过表达和干扰miR-144-3P后观察细胞分化水平变化。方法1.收集40例未经治疗的ADHD患儿和120例相同条件的健康儿童血清样本,形成1比3配比配对,经过芯片筛选出血清中差异表达的全部microRNA。重新收集血清样本,RT-qPCR对差异表达microRNA进行验证。2.通过生物信息网站在有差异的microRNA中分析筛选出靶向调节FOXO1的microRNA。荧光素酶(Luciferas)活性实验验证该microRNA是否靶向结合FOXO1 3?UTR。3比较WKY和SHR大鼠PFC miR-144-3P和FOXO1表达水平差异。SHR大鼠PFC注射过表达慢病毒载体miR-144-3p-virus,通过旷场实验和迷宫实验观察SHR大鼠ADHD样行为变化;取PFC脑组织,分别在mRNA和蛋白水平检测FOXO1和TH的表...

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【部分图文】：

图1:ADHD儿童和健康儿童血清差异表达microRNA热图

收集40例未经治疗的ADHD患儿和120例相同条件的健康儿童血清样本,形成1比3配比配对,通过miRNA芯片获得ADHD患儿和健康儿童血清全部miRNA表达谱,从中筛选出有统计学差异的microRNA。如图1所示:以紫色代表低表达量,红色代表高表达量,芯片显示数值大小即为miRN....

图4、A:FOXO13"UTR区野生型与miR-144-3p结合位点及FOXO13"UTR突变型示意图,;B、C:荧光素酶报告载体野生型或突变型与pLL3.7-miR-144或pLL3.7共转染后测荧光素酶活性(与对照组相比,**P<0.01)。

构建荧光素酶报告载体psi-CHECK2-FOXO13?UTR和psi-CHECK2-FOXO13?UTRmut,该载体包含FOXO13"UTR与miR-144结合区的野生型和突变型(4A)。将载体与pll3.7-miR-144共转染,并在24小时后检测Luciferase活....

图4、A:FOXO13"UTR区野生型与miR-144-3p结合位点及FOXO13"UTR突变型示意图,;B、C:荧光素酶报告载体野生型或突变型与pLL3.7-miR-144或pLL3.7共转染后测荧光素酶活性(与对照组相比,**P<0.01)。

图4、A:FOXO13"UTR区野生型与miR-144-3p结合位点及FOXO13"UTR突变型示意图,;B、C:荧光素酶报告载体野生型或突变型与pLL3.7-miR-144或pLL3.7共转染后测荧光素酶活性(与对照组相比,**P<0.01)。六、miR-144-3p调....

图5:A:miR-144-3p过表达后FOXO1mRNA表达水平;B:miR-144-3p过表达后FOXO1蛋白表达水平及量化图;C:miR-144-3p过表达后THmRNA表达水平;D:FOXO1过表达后TH蛋白表达水平及量化图;E:FOXO1质粒过表达效率检测(左)及FOXO1过表达后THmRNA表达水平(右)。(与对照组相比,*P<0.05)

pLL3.7-miR-144和pLL3.7及FOXO1过表达质粒(pcDNA3.1B-FOXO1)和pcDNA3.1B(mock)分别转染到SH-SY5Y细胞中,24h后收集RNA,分别检测FOXO1和THmRNA及蛋白表达量。结果显示,miR-144-3p过表达后FOXO1表....

本文编号：3963711