肽聚糖识别蛋白1抗鼠衣原体生殖道感染的研究

发布时间：2022-12-04 00:50

　　目的:探讨肽聚糖识别蛋白1（peptidoglycan recognition protein 1,PGLYRP-1）抗鼠衣原体（Chlamydia muridarum,Cm）小鼠生殖道感染的作用及效果。方法:PCR技术扩增PGLYRP-1基因,构建pET-28a（+）/PGLYRP-1原核表达质粒。经测序鉴定后,转化到大肠杆菌BL21中,IPTG诱导表达PGLYRP-1重组蛋白,Ni²⁺-NTA对重组蛋白进行纯化,Western blot鉴定;BCA法测定PGLYRP-1重组蛋白的浓度;多粘菌素B去除重组蛋白的内毒素。选取6-8周龄BALB/c小鼠,注射甲羟孕酮2.5mg,同步小鼠体内雌激素。1周后,分为三组:第一组为阴性对照,注射等体积PBS;第二组为PGLYRP-1蛋白抗感染组,以5.0×10~5 IFUs的Cm接种于小鼠阴道后穹隆,剂量为15μL/只,感染后的第7d和第10d,分别取25μL剂量为50μg、100μg、200μg的PGLYRP-1蛋白注射至抗感染组小鼠阴道后穹隆;第三组感染Cm作为阳性对照,即用5.0×10~5IFUs的Cm接种于小鼠阴道后... 

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
主要缩略词对照索引
第1章 绪论
第2章 实验材料
    2.1 主要仪器设备
    2.2 菌株和细胞株
    2.3 试剂
第3章 实验方法
    3.1 PET-28A(+)/PGLYRP-1 原核表达载体的构建与鉴定
    3.2 PGLYRP-1 重组蛋白的表达
    3.3 PGLYRP-1 重组蛋白的纯化与鉴定
    3.4 PGLYRP-1 重组蛋白浓度的测定
    3.5 多粘菌素B(PMB)去除蛋白的内毒素
    3.6 鼠衣原体的培养
    3.7 PGLYRP-1 重组蛋白的抗感染动物实验
    3.8 小鼠上生殖道病变的肉眼观察及组织病理学评分
    3.9 统计学方法
第4章 实验结果
    4.1 PGLYRP-1 原核表达载体构建鉴定
    4.2 重组蛋白PGLYRP-1 的诱导表达
    4.3 PGLYRP-1 重组蛋白的纯化与浓缩
    4.4 WESTERN BLOT法鉴定PGLYRP-1 蛋白
    4.5 小鼠包涵体的计数
    4.6 小鼠输卵管的积水情况
    4.7 小鼠输卵管的病理改变
    4.8 小鼠输卵管组织匀浆的细胞因子检测
第5章 讨论
第6章 结论
附录 PET-28A(+)/PGLYRP-1 原核表达重组质粒测序图谱
参考文献
综述
    参考文献
作者攻读学位期间的科研成果
资助基金项目
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]哺乳动物中肽聚糖识别蛋白的研究进展[J]. 李圣各,袁子越,张嵘.  沈阳药科大学学报. 2016(08)

博士论文
[1]鼠衣原体质粒缺失株的构建及体外传代对其生物学特性和致病性的影响[D]. 陈超群.南华大学 2015



本文编号：3707295