不同消化方法对心肌成纤维细胞体外培养影响

发布时间：2023-03-27 20:59

　　目的对比不同消化方法对原代乳鼠心肌成纤维细胞体外培养的影响,探求更高效的细胞分离、培养方法。方法改良既往文献报道的心肌成纤维细胞分离方法,选用胶原酶、胰酶、胶原酶加胰酶消化液分别对同等数量随机挑选的同窝出生1～2 d的SD乳鼠进行心肌成纤维细胞分离,从细胞数量及活性、细胞增殖、细胞纯度及对中药、西药反应灵敏度等方面对分离出的第0代(P0)细胞及传代至第2代(P2)的细胞进行比较。结果胶原酶消化法分离所得细胞在数量、成活率、贴壁速度、增殖速度方面,明显优于胰酶消化法或胶原酶加胰酶消化法,P<0.05,差异有统计学意义;在形态学上并无明显差异,且细胞纯度均可达到95%;胶原酶消化法所得细胞对中药、西药灵敏度较高,P<0.05,差异有统计学意义。结论选用胶原酶作为原代乳鼠心肌成纤维细胞的消化酶,运用时间梯度消化细胞,可以高效得到数量多、活性好、纯度高、对药物反应灵敏的细胞。

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【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 动物
    1.2 主要试剂、耗材、设备及仪器
        1.2.1 主要试剂
        1.2.2 主要耗材
        1.2.3 主要设备及仪器
    1.3 主要方法
        1.3.1 心肌成纤维细胞的分离与培养
        1.3.2 鉴定细胞数量及成活率
        1.3.3 细胞形态学观察
        1.3.4 鉴定细胞增殖情况
        1.3.5 鉴定细胞纯度
        1.3.6 Western blot法检测血管紧张素Ⅱ（AngiotensinⅡ，AngⅡ）干预后心肌成纤维细胞α-SMA的表达及对药物的反应
        1.3.7 统计方法
2 结果
    2.1 三种消化方法分离所得细胞P0代和P2代细胞数量及成活率比较
    2.2 细胞形态学观察
    2.3 细胞增殖情况
    2.4 细胞纯度检测
    2.5 心肌成纤维细胞α-SMA蛋白表达情况
3 结论



本文编号：3772839