Ipr1/PPE68重组BCG诱导BALB/C小鼠免疫应答的探讨

发布时间：2023-04-26 18:33

　　目的构建Ipr1/PPE68重组卡介苗(Recombinant BCG,rBCG),探讨其诱导BALB/C小鼠免疫应答的效果。方法将Ipr1和PPE68基因及结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)复制子OriM分别插入pBudCE4.1的多克隆位点,构建共表达穿梭质粒pBIPO,将其电转入BCG,构建Ipr1/PPE68-rBCG并将rBCG免疫BALB/C小鼠,检测小鼠血清中IgG2a、IL-12、IFN-γ及IL-4的水平、特异性脾淋巴细胞增殖和CD4+和CD8+T细胞数量,同时观察脾、肺荷菌量及脾、肺组织病理学变化。结果酶切测序及菌落PCR鉴定Ipr1和PPE68以及OriM基因序列与理论值相符,Western-blotting结果显示Ipr1和PPE68蛋白成功表达。Ipr1/PPE68-rBCG免疫小鼠后,血清中的IgG2a和IL-12水平及脾淋巴细胞增殖情况明显高于对照组,但与BCG组相比没有显著意义;IFN-γ水平显著低于BCG组,与对照组相比无显著性差异;各组别IL-4的水平差异均不明显。脾、肺荷菌实验未见菌落生长,肺、脾组织未见病...

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 实验材料
    1.2 方法
        1.2.1 Ipr1/PPE68-rBCG的构建
        1.2.2 动物免疫
        1.2.3 特异性脾淋巴细胞增殖实验
        1.2.4 检测血清中IgG2a的水平
        1.2.5 检测血清中细胞因子IL-12、IFN-γ和IL-4的水平
        1.2.6 流式细胞仪检测CD4+/CD8+T细胞的表达
        1.2.7 小鼠脾、肺荷菌量检测
        1.2.8 脾、肺组织病理切片
        1.2.9 统计分析
2 结果
    2.1 质粒pBIPO酶切鉴定结果
    2.2 Ipr1/PPE68 rBCG菌落PCR鉴定结果
    2.3 小鼠血清中IgG2a的水平
    2.4 小鼠血清中IL-12、IFN-γ和IL-4的水平
    2.6 小鼠特异性脾淋巴增殖实验的结果
    2.7 CD4+和CD8+T淋巴细胞表达情况
    2.8 脾、肺荷菌实验的结果
    2.9 组织病理学表现
3 讨论



本文编号：3801997