CHO细胞表达的Ⅱ型单纯疱疹病毒膜糖蛋白G

发布时间：2023-04-29 19:35

　　Ⅱ型单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus type Ⅱ,HSV-Ⅱ)的膜糖蛋白G(HSV-Ⅱ gG)在生物合成过程中被切割为两个片段,然而,HSV-Ⅱ gG蛋白的切割位点迄今未被实验测定。HSV-Ⅱ gG上带有大量的糖基化,然而糖基修饰在蛋白链上的分布还没有详细的实验确定。在本研究中,中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)重组表达的HSV-Ⅱ gG的胞外区(HSV-Ⅱ gG ECD)的两个切割产物(一个39kD,一个64kD)被用串联液相色谱-质谱(LC/MS)进行肽图分析。LC/MS肽图分析显示,39kD的产物是HSV-Ⅱ gG ECD蛋白切割后的N端片段,LC/MS肽图分析可以确定HSV-Ⅱ gG ECD的肽链切割点在第335位氨基酸。亲和层析和蛋白免疫印迹实验显示64kD产物是HSV-Ⅱ gG ECD蛋白切割后的C端片段。对两个片段的糖基化分析显示,39kD和64kD蛋白产物带有相似程度的N-连接的糖基修饰(各片段带两个N-连接的糖基化),而O-连接的糖基化仅发生在64kD片段上,而且糖基化程度非常高(几乎相当于该段蛋白链本身的分子量)。本研究的结果支持HSV-Ⅱ gG...

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【文章目录】：
材料与方法
    1稳定表达HSV-II gG-ECD的CHO细胞株的筛选
    2 SDS-PAGE、Western Blot和LC/MS肽图分析
    3HSV-II gG ECD的39kD和64kD蛋白产物的纯化
    4HSV-II gG-ECD的蛋白产物的肽糖苷酶F(PNGase F）消化
    5HSV-II gG-ECD的蛋白产物的O-连接糖基化的检验
结果
    1 CHO细胞表达的HSV-II gG ECD
    2HSV-II gG ECD两个蛋白产物的液-质肽谱分析
    3 HSV-II gG ECD的39kD和64kD蛋白产物的N-连接糖基化
    4HSV-II gG ECD的切割产物的O-连接的糖基化
讨论



本文编号：3805611