泰妙菌素单克隆抗体的制备与鉴定

发布时间：2023-05-03 19:18

　　泰妙菌素(Tiamulin,TML)是一种半合成的双萜烯类兽用抗生素,主要用于治疗鸡慢性呼吸道疾病。TML的规范使用会很好的发挥其抗菌效果,但若滥用TML就会在动物源性食品中残留,进而对人们的健康造成潜在的危害,引发食品安全与公共卫生问题。检测TML常用的的方法有色谱法、免疫学技术等。其中,免疫学检测中的试纸检测方法因其具有敏感、特异、快速、简便、且可实现现场实时检测的优点被广泛应用。高特异性、高亲和力的单克隆抗体的制备,是建立TML免疫学检测方法的基础。本研究根据TML的结构特点对TML五元环上的酮羰基进行改造并合成人工完全抗原;免疫小鼠;通过细胞融合技术与有限稀释亚克隆技术研制出高特异性、高敏感性和高亲和力的抗TML单克隆抗体,建立能稳定分泌抗TML单克隆抗体的细胞株,为建立快速检测TML的免疫学方法奠定基础。用肟化法与活性酯法,将泰妙菌素(TML)与载体蛋白(BSA)偶联,制备免疫原TML-BSA。同法制备包被原TML-OVA。对制备的人工完全抗原进行紫外线扫描(UV)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定。免疫Balb/c小鼠的结果表明:2号小鼠的免疫效果最好,其免疫血清...

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
1 文献综述
    1.1 食品安全的简介
    1.2 泰妙菌素的简介
        1.2.1 泰妙菌素的理化性质
        1.2.2 泰妙菌素的化学结构
        1.2.3 泰妙菌素的抗菌活性及作用机理
        1.2.4 泰妙菌素的用法
        1.2.5 泰妙菌素的毒性和不良症状
    1.3 泰妙菌素常用的检测方法
        1.3.1 气相色谱法
        1.3.2 高效液相色谱法
        1.3.3 超高效液相色谱串联-质谱法检测TML
        1.3.4 免疫学检测方法
    1.4 抗体的应用
        1.4.1 多克隆抗体技术
        1.4.2 单克隆抗体技术
    1.5 兽药人工完全抗原的制备
        1.5.1 兽药人工完全抗原制备的原则
        1.5.2 常用的兽药人工完全抗原的合成方法
    1.6 本研究的目的及主要内容
2 TML人工完全抗原的合成及鉴定
    2.1 材料
        2.1.1 实验仪器及设备
        2.1.2 主要耗材及试剂
        2.1.3 主要溶液的配制
        2.1.4 实验动物
    2.2 实验方法
        2.2.1 TML人工完全抗原的合成
        2.2.2 TML人工完全抗原浓度的测定
        2.2.3 TML人工完全抗原UV鉴定
        2.2.4 TML人工完全抗原SDS-PAGE鉴定
        2.2.5 TML人工完全抗原免疫学鉴定
    2.3 结果
        2.3.1 人工完全抗原蛋白浓度的计算结果
        2.3.2 紫外线扫描法鉴定结果
        2.3.3 SDS-PAGE鉴定结果
        2.3.4 免疫学鉴定
    2.4 讨论
        2.4.1 载体蛋白的选择
        2.4.2 人工完全抗原的制备
    2.5 小结
3 TML单克隆抗体的制备及鉴定
    3.1 材料
        3.1.1 实验仪器
        3.1.2 试剂及耗材
        3.1.3 实验溶液
        3.1.4 实验动物及细胞
    3.2 实验方法
        3.2.1 骨髓瘤细胞培养
        3.2.2 融合鼠的选择及其超免
        3.2.3 饲养细胞的制备
        3.2.4 小鼠脾细胞的制备
        3.2.5 细胞融合
        3.2.6 阳性杂交瘤细胞的筛选
        3.2.7 阳性杂交瘤细胞的亚克隆
        3.2.8 杂交瘤细胞株的扩大培养与及时冻存
        3.2.9 杂交瘤细胞株的复苏和其稳定性
        3.2.10 单抗腹水的制备及纯化
    3.3 单抗的鉴定
        3.3.1 单抗浓度检测及纯度的测定
        3.3.2 单抗效价及敏感性的测定
        3.3.3 单抗亲和力的测定
        3.3.4 单抗交叉反应率(CR)的测定
    3.4 实验结果
        3.4.1 杂交瘤细胞株的建立
        3.4.2 杂交瘤细胞株的稳定性
        3.4.3 单抗的浓度及纯度
        3.4.4 单抗的效价及敏感性
        3.4.5 单抗的亲和常数
        3.4.6 单抗的交叉反应率
    3.5 讨论
        3.5.1 融合时间的选择
        3.5.2 关于融合效率和筛选杂交瘤细胞
        3.5.3 关于单抗的大量制备及其纯化
    3.6 小结
    3.7 结论与讨论
参考文献
附录 英文缩写词汇表
致谢
个人简历、在校期间发表的学术论文与研究成果



本文编号：3807129