巴泰病毒单克隆抗体的制备及鉴定

发布时间：2023-05-14 19:04

　　巴泰病毒(Batai virus,BATV)是一种人兽共患病毒,近年在全球广泛流行。我国也有人和动物感染的相关报道,而目前对BATV的研究仅局限于分子检测和全基因测序,还没有关于BATV单克隆抗体的相关研究,但制备特异性强、活性好的单克隆抗体也是防控BATV的关键。为了制备BATV单克隆抗体,本研究利用纯化的BATV作为抗原免疫雌性BALB/c小鼠,制备鼠源单克隆抗体。通过免疫小鼠后断尾取血,间接ELISA测其血清效价后,将SP2/0细胞与小鼠的脾细胞融合。ELISA方法筛选阳性细胞株,并进行亚克隆后制备单抗腹水,并利用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化腹水。结果获得7株单克隆抗体,包括5株IgG型和2株IgM型。其中制备的3E2单克隆抗体效价最高为1∶32 000。经间接ELISA、间接免疫荧光和Western Blot检测表明,制备的3E2单抗具有较好的纯度、活性和特异性,为BATV快速检测方法的建立及致病机制研究奠定了基础。

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【文章目录】：
材料与方法
    1 实验材料和试剂
        1.1 实验动物
        1.2 抗原和细胞系
        1.3 主要试剂及仪器
    2 病毒纯化
    3 单抗筛选方法（间接ELISA）的建立
    4 杂交瘤细胞的制备与筛选
        4.1 免疫雌性BALB/c小鼠
        4.2 细胞融合
        4.3 杂交瘤细胞的筛选
    5 单克隆抗体亚型的鉴定
    6 单克隆抗体小鼠腹水制备及效价检测
    7 特异性鉴定
    8 单克隆抗体的鉴定
        8.1 间接免疫荧光鉴定
        8.2 蛋白质印迹（Western Blot）鉴定
结果
    1 BATV的培养及纯化
    2免疫BALB/c小鼠效价的检测
    3单克隆抗体的筛选
    4单克隆抗体亚型分类
    5小鼠腹水单克隆抗体效价测定
    6单克隆抗体的特异性鉴定
    7单克隆抗体的IFA鉴定
    8单克隆抗体Western Blot鉴定
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