成年小鼠第四脑室损伤后CD133+神经干细胞激活修复的研究
发布时间：2023-09-02 13:27
神经干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞。在特定的条件下能够分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞,从而参与神经发生和损伤修复。通常情况下,成体神经干细胞大多数处于静息状态。在病理状况下,这些静息态的神经干细胞可以被激活,经增殖、迁移和分化,从而在损伤的部位进行神经元的再生和环路重建。目前神经干细胞主要分布在侧脑室的室管膜区域和海马齿状回颗粒下层。我们在成年小鼠的非神经源性区域“第四脑室室管膜区”发现存在静息态的CD133+神经干细胞。因此,研究第四脑室静息态神经干细胞及由神经干细胞形成的神经发生现象,对于进一步了解大脑功能、神经系统的发育、神经疾病的发病机理以及内源性神经干细胞对中枢神经系的损伤修复等都具有重要的意义。本文以示踪小鼠CD133-CreERT2:R26R-Rosa26-CAG-LSL-z SGreen为实验材料,通过对静息态的CD133神经干细胞的示踪来探究小鼠第四脑室中的神经发生以及损伤后神经干细胞的激活和血管系统的再生。实验结果表明,在正常的生理状况下,第四脑室周围存在着各种类型的神经细胞,说明正常情况下第四脑室的神经发生维持着正常的生理功能。通过立体定位...
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
第1章 前言
1.1 神经干细胞简介
1.2 成年哺乳动物大脑中静息态和激活态的神经干细胞
1.2.1 海马中静息态和激活态的神经干细胞
1.2.2 侧脑室室管膜下区中静息态和激活态的神经干细胞
1.2.3 嗅球上皮中静息态和激活态的神经干细胞
1.2.4 第四脑室中静息态和激活态的神经干细胞
1.3 静息态神经干细胞激活的调控
1.3.1 肿瘤基因对NSC激活的调控
1.3.2 表观遗传修饰对NSC激活的调节
1.3.3 微环境对NSCs激活的影响
1.4 CD133简介
1.4.1 CD133、AC133和Prominin1的来源
1.4.2 CD133的结构
1.4.3 CD133的功能
1.5 Cre/loxP重组系统
1.5.1 Cre/loxP系统的基本原理
1.5.2 Cre/loxP系统诱导基因重组的方式
1.5.3 Cre/loxP系统的优点
1.5.4 他莫昔芬诱导Cre/loxP系统基因敲出
1.6 脑损伤
1.7 本文研究意义
第2章 实验设备与试剂耗材
2.1 实验设备
2.2 试剂耗材
2.3 实验抗体信息
2.4 引物信息
2.5 实验动物
第3章 实验方法
3.1 小鼠基因型鉴定
3.1.1 主要试剂
3.1.2 PCR鉴定基因型
3.2 CD133-CreERT2:R26R-zSGreen小鼠注射Tamoxifen
3.2.1 主要试剂和耗材
3.2.2 配制10mg/mlTamoxifen溶液
3.2.3 CD133-CreERT2:R26R-zSGreen小鼠注射Tamoxifen
3.3 小鼠灌注取脑
3.3.1 主要试剂、器械和耗材
3.3.2 小鼠心脏灌注
3.3.3 小鼠大脑取材
3.4 立体定位损伤
3.4.1 主要试剂、器械和仪器
3.4.2 配制麻药三溴乙醇
3.4.3 小鼠第四脑室立体定位
3.4.4 小鼠自体取血注射
3.5 组织冰冻切片
3.5.1 主要器材
3.5.2 冰冻切片机的使用
3.6 组织免疫荧光
3.6.1 主要器材和试剂
3.6.2 试剂配制
3.6.3 组织免疫荧光步骤
3.7 共聚焦显微镜成像
3.7.1 激光共聚焦显微镜(LeicaTCSSP5II)使用说明
3.7.2 激光共聚焦显微镜(NikonA1R)使用说明
第4章 实验结果
4.1 小鼠基因型鉴定结果
4.1.1 纯合CD133-CreERT2小鼠鉴定结果
4.1.2 纯合Rosa26-CAG-LSL-zSGreen小鼠鉴定结果
4.2 生理状况下第四脑室存在的细胞类型
4.2.1 生理状况下第四脑室存在着CD133+的神经干细胞
4.2.2 生理状况下第四脑室存在着星形胶质细胞
4.2.3 生理状况下第四脑室存在着CD133+/GFAP+B细胞
4.2.4 生理状况下第四脑室存在着Nestin+的神经干细胞
4.2.5 生理状况下第四脑室存在着神经元
4.2.6 生理状况下第四脑室存在着少突胶质细胞
4.3 生理状况下第四脑室CD133+神经干细胞的分布
4.3.1 第四脑室CD133+神经干细胞分布
4.4 示踪小鼠注射Tamoxifen后最佳收获时间的探究
4.4.1 示踪小鼠注射Tamoxifen后不同时间免疫荧光结果
4.4.2 示踪小鼠注射Tamoxifen后不同时间zSGreen统计分析
4.5 第四脑室的损伤修复实验设计
4.5.1 损伤修复实验设计图
4.6 第四脑室损伤模型的建立
4.6.1 第四脑室损伤模型示意图
4.6.2 第四脑室损伤后的细胞变化
4.7 第四脑室中CD133+神经干细胞对损伤的修复
4.7.1 第四脑室损伤后不同时间点CD133的表达
4.7.2 第四脑室损伤后不同时间点GFAP的表达
4.7.3 第四脑室损伤后血管内皮细胞的变化
4.7.4 第四脑室损伤后血管系统干性细胞的修复
第5章 结论与讨论
5.1 结论
5.2 讨论
致谢
参考文献
本文编号：3845285
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
第1章 前言
1.1 神经干细胞简介
1.2 成年哺乳动物大脑中静息态和激活态的神经干细胞
1.2.1 海马中静息态和激活态的神经干细胞
1.2.2 侧脑室室管膜下区中静息态和激活态的神经干细胞
1.2.3 嗅球上皮中静息态和激活态的神经干细胞
1.2.4 第四脑室中静息态和激活态的神经干细胞
1.3 静息态神经干细胞激活的调控
1.3.1 肿瘤基因对NSC激活的调控
1.3.2 表观遗传修饰对NSC激活的调节
1.3.3 微环境对NSCs激活的影响
1.4 CD133简介
1.4.1 CD133、AC133和Prominin1的来源
1.4.2 CD133的结构
1.4.3 CD133的功能
1.5 Cre/loxP重组系统
1.5.1 Cre/loxP系统的基本原理
1.5.2 Cre/loxP系统诱导基因重组的方式
1.5.3 Cre/loxP系统的优点
1.5.4 他莫昔芬诱导Cre/loxP系统基因敲出
1.6 脑损伤
1.7 本文研究意义
第2章 实验设备与试剂耗材
2.1 实验设备
2.2 试剂耗材
2.3 实验抗体信息
2.4 引物信息
2.5 实验动物
第3章 实验方法
3.1 小鼠基因型鉴定
3.1.1 主要试剂
3.1.2 PCR鉴定基因型
3.2 CD133-CreERT2:R26R-zSGreen小鼠注射Tamoxifen
3.2.1 主要试剂和耗材
3.2.2 配制10mg/mlTamoxifen溶液
3.2.3 CD133-CreERT2:R26R-zSGreen小鼠注射Tamoxifen
3.3 小鼠灌注取脑
3.3.1 主要试剂、器械和耗材
3.3.2 小鼠心脏灌注
3.3.3 小鼠大脑取材
3.4 立体定位损伤
3.4.1 主要试剂、器械和仪器
3.4.2 配制麻药三溴乙醇
3.4.3 小鼠第四脑室立体定位
3.4.4 小鼠自体取血注射
3.5 组织冰冻切片
3.5.1 主要器材
3.5.2 冰冻切片机的使用
3.6 组织免疫荧光
3.6.1 主要器材和试剂
3.6.2 试剂配制
3.6.3 组织免疫荧光步骤
3.7 共聚焦显微镜成像
3.7.1 激光共聚焦显微镜(LeicaTCSSP5II)使用说明
3.7.2 激光共聚焦显微镜(NikonA1R)使用说明
第4章 实验结果
4.1 小鼠基因型鉴定结果
4.1.1 纯合CD133-CreERT2小鼠鉴定结果
4.1.2 纯合Rosa26-CAG-LSL-zSGreen小鼠鉴定结果
4.2 生理状况下第四脑室存在的细胞类型
4.2.1 生理状况下第四脑室存在着CD133+的神经干细胞
4.2.2 生理状况下第四脑室存在着星形胶质细胞
4.2.3 生理状况下第四脑室存在着CD133+/GFAP+B细胞
4.2.4 生理状况下第四脑室存在着Nestin+的神经干细胞
4.2.5 生理状况下第四脑室存在着神经元
4.2.6 生理状况下第四脑室存在着少突胶质细胞
4.3 生理状况下第四脑室CD133+神经干细胞的分布
4.3.1 第四脑室CD133+神经干细胞分布
4.4 示踪小鼠注射Tamoxifen后最佳收获时间的探究
4.4.1 示踪小鼠注射Tamoxifen后不同时间免疫荧光结果
4.4.2 示踪小鼠注射Tamoxifen后不同时间zSGreen统计分析
4.5 第四脑室的损伤修复实验设计
4.5.1 损伤修复实验设计图
4.6 第四脑室损伤模型的建立
4.6.1 第四脑室损伤模型示意图
4.6.2 第四脑室损伤后的细胞变化
4.7 第四脑室中CD133+神经干细胞对损伤的修复
4.7.1 第四脑室损伤后不同时间点CD133的表达
4.7.2 第四脑室损伤后不同时间点GFAP的表达
4.7.3 第四脑室损伤后血管内皮细胞的变化
4.7.4 第四脑室损伤后血管系统干性细胞的修复
第5章 结论与讨论
5.1 结论
5.2 讨论
致谢
参考文献
本文编号：3845285
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/jichuyixue/3845285.html