Spastin调控AMPA受体GluA1亚基的内化及其机制

发布时间：2023-10-13 18:18

　　目的本研究主要探讨微管切割蛋白Spastin如何调控AMPA受体GluA1亚基的内化。材料与方法首先我们构建了Spastin及其截短片段的各种表达载体,用pull down和Co-IP的实验方法,明确Spastin和GluA1存在相互作用及其具体结合部位;然后在海马神经元中观察Spastin和GluA1在神经元中树突及树突棘的共定位情况;接下来在GluA1-HEK293T稳定细胞株及海马神经中过表达Spastin WT,通过免疫荧光以及提取细胞膜蛋白观察Total GluA1和Surface GluA1的表达变化,并用全细胞膜片钳记录AMPA电流和mEPSC的变化;最后构建Spastin功能域的真核表达突变体,在稳定细胞株和海马神经元中过表达,明确Spastin WT及其各功能域对GluA1的具体影响。结果1)通过pull down和Co-IP实验中明确Spastin与GluA1存在相互作用,且作用部位位于Spastin的MIT功能域和GluA1的C末端;2)GluA1-HEK293T稳定细胞株及神经元中过表达Spastin WT,可抑制细胞膜GluA1的表达;3)Spastin WT...

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【学位级别】：硕士

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中文摘要
ABSTRACT
前言
    1.1 神经元的突触传递
    1.2 树突棘
        1.2.1 突触的信息传递与树突棘的关系
        1.2.2 树突棘与AMPA受体的关系
    1.3 AMPA受体
        1.3.1 AMPA受体的组成
        1.3.2 AMPA受体转运
    1.4 Spastin
        1.4.1 Spastin的概述
        1.4.2 Spastin的微管切割功能
        1.4.3 Spastin与膜转运
    1.5 研究目的和意义
材料和方法
    2.1 实验材料
    2.2 实验方法
    2.3 数据统计与分析
实验结果
    3.1 Spastin与GluA1存在相互作用
    3.2 明确Spastin与GluA1的结合部位
    3.3 稳定细胞株过表达Spastin WT促进GluA1内化
    3.4 神经元过表达Spastin WT促进GluA1内化
    3.5 Spastin的功能域与切割功能
    3.6 稳定株中切割功能和MIT共同促进GluA1内化
    3.7 神经元中切割功能和MIT共同促进GluA1内化
讨论
    4.1 Spastin与GluA1的相互作用
    4.2 Spastin促进GluA1内化
    4.3 Spastin与微管切割
    4.4 Spastin的切割功能及MIT区促进GluA1内化
结论
参考文献
主要中英文缩略词
在读期间发表的论文
致谢



本文编号：3853654