miR-124-3p通过负调控Caveolin-1表达N2a/APPswe细胞凋亡率及细胞内钙离子浓度

发布时间：2024-06-13 20:27

　　目的:探讨在阿尔茨海默病(Alzheimer’s diseases,AD)细胞模型中miR-124-3p通过调控Caveolin-1的表达对细胞凋亡率及钙离子浓度的影响。方法:体外培养野生型N2a(N2a/WT)和N2a/APPswe细胞,real-time PCR及Western blot分别检测miR-124-3p与β-淀粉样蛋白前体蛋白(β-amyloid precursor protein,APP)m RNA及蛋白的表达。双荧光素酶报告实验分析miR-124-3p与Caveolin-1之间靶向调控关系。N2a/APPswe细胞瞬时转染miR-124-3p模拟物(mimics),real-time PCR、Western blot分别检测Caveolin-1 m RNA和蛋白的表达。N2a/APPswe细胞分别瞬时转染miR-124-3p模拟物(mimics)、pc DNA-Caveolin-1、Caveolin-1-si RNA,流式细胞仪分析细胞凋亡水平,测定细胞内游离钙离子浓度。结果:与WT组相比,APPswe组APP m RNA和蛋白水平表达都明显升高(分别为P=0.00...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 实验细胞
        1.1.2 主要试剂
    1.2 方法
        1.2.1 细胞分组
        1.2.2 细胞培养
        1.2.3 脂质体介导细胞转染
        1.2.4 双荧光素酶报告实验
        1.2.5 流式细胞仪检测细胞凋亡
        1.2.6 细胞钙离子浓度测定
        1.2.7 real-time PCR检测mi R-124-3p、Caveolin-1的表达
        1.2.8 Western blot检测APP、Caveolin-1表达
    1.3 统计学处理
2 结果
    2.1 利用生物学软件进行靶基因预测
    2.2 N2a/APPswe细胞中APP以及mi R-124-3p表达的变化
    2.3 mi R-124-3p对Caveolin-1 3’UTR具有靶向调控作用
    2.4 mi R-124-3p对Caveolin-1 m RNA及蛋白表达的影响
    2.5 mi R-124-3p对细胞凋亡率、细胞内钙离子浓度的影响
    2.6 过表达Caveolin-1对细胞凋亡率、细胞内钙离子浓度的影响
    2.7 干扰Caveolin-1表达对细胞凋亡率、细胞内钙离子浓度的影响
3 讨论



本文编号：3993610