OPG在白色脂肪棕色化中的作用及机制

发布时间：2024-03-24 05:38

　　第一部分OPG敲除改善高脂饮食诱导的肥胖及其并发症目的:探究OPG敲除对肥胖的影响,了解OPG与肥胖的初步关系方法:利用高脂饮食对纯合OPG敲除鼠和C57野生型小鼠造肥胖模型,分为普食喂养野生型小鼠组(SD-WT)、普食喂养敲除小鼠组(SD-OPG^-/-)、高脂喂养野生型小鼠组(HFD-WT)、高脂喂养敲除小鼠组(HFD-OPG^-/-),从8周龄开始造模12周,每周测量体重。造模完成时,测量四组小鼠的空腹血糖、摄食和肛温,利用能量代谢评估系统监测小鼠。取造模完成的小鼠组织,计算脂体比,取脂肪组织做石蜡切片,通过HE染色观察脂肪细胞的形态大小。利用荧光实时定量PCR检测i WAT棕色化指标及脂肪形成相关指标,western blot检测e WAT胰岛素敏感性指标。用荧光实时定量PCR方法检测普食喂养C57雄性小鼠的e WAT,i WAT及BAT中OPG的m RNA表达情况,再用western blot检测OPG在三种脂肪组织中的蛋白表达水平。通过定量PCR的方法检测普食喂养C57小鼠、高脂喂养C57小鼠、db/db小鼠的皮下脂肪组织中的OPG的...

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图1.1退火温度摸索的PCR反应程序

不同的引物可能存在不同的最佳退火温度,新设计的引物需要摸索最佳退火温度。将竖列的8联管中加入相同的样本及引物,设置如下的PCR反应程序。根据CT值及溶解曲线选择最佳退火温度。

图1.2蛋白质浓度检测标准曲线

在540nm处进行比色,测量吸光度值并计算样本蛋白浓度。2.16蛋白质免疫印迹实验(Westernblot)

图1.3OPG敲除鼠繁殖后基因鉴定跑胶图

利用OPG杂合子或纯合子进行配种后,进行大量繁殖。新出生的小鼠第6周剪鼠尾行基因型鉴定。鉴定结果如图1.3所示,杂合子配种繁殖得到杂合子、纯合子及野生型。进一步扩大繁殖得到大批量纯合子(图1.3)。3.2造模小鼠体重变化

图1.4小鼠大体照

将8周龄的WT小鼠和OPG敲除小鼠随机各分为两组,喂养普食或高脂饲料喂养12周,共分为以下四组,SD-WT,SD-OPG-/-,HFD-WT,HFD-OPG-/-。小鼠大体形态显示,OPG敲除小鼠的体型明显小于WT小鼠(图1.4)。体重结果分析显示,普食喂养情况下,OPG敲除鼠的....

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