基于Caspase-3、Bcl-2、Bax的阿魏酸对表皮黑素细胞抗氧化保护效应及凋亡的影响

发布时间：2017-04-23 09:05

  本文关键词：基于Caspase-3、Bcl-2、Bax的阿魏酸对表皮黑素细胞抗氧化保护效应及凋亡的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的本课题拟以自由基调控黑素生成这一热点作为切入点,通过体外实验,将阿魏酸对黑素细胞的调控作为整体进行研究,在细胞水平,进一步研究阿魏酸对正常人表皮黑素细胞抗氧化效应及凋亡的影响,阐明和揭示阿魏酸治疗色素障碍性皮肤病的部分作用机制,为中药治疗色素障碍性皮肤病提供可靠的实验数据及新的思路。方法1.正常人表皮黑素细胞的传代培养及鉴定将引进的黑素细胞株进行传代培养,用L-DOPA染色法鉴定所培养细胞为正常人表皮黑素细胞。2.不同浓度阿魏酸处理后正常人表皮黑素细胞内ROS、SOD、MDA水平的检测采用免疫荧光术检测不同浓度阿魏酸处理后正常人黑素细胞内ROS水平,采用WST-1法测定阿魏酸处理后正常人表皮黑素细胞内SOD水平和TBA法测定MDA水平。3.不同浓度阿魏酸处理后正常人表皮黑素细胞内caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达水平的测定采用Western blot蛋白质印迹法测定不同浓度阿魏酸溶液对正常人表皮黑素细胞内caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白的表达水平。4.采用SPSS17.0统计分析,所有数据采用()表示,运用One-Way ANOVA法进行组间分析,方差齐时运用SNK法进行两两比较,当P0.05表示差异具有统计学意义。结果1.正常人表皮黑素细胞经L-DOPA染色后,呈阳性反应,各细胞树突及胞浆呈现棕褐色或黑色。2.对照组含有蓝绿色荧光的细胞数最多,实验组内含有蓝绿色荧光的细胞量随阿魏酸浓度的升高而逐渐减少,反映黑素细胞内ROS水平随着阿魏酸浓度的升高而逐渐降低。3.实验组与对照组相对比,黑素细胞内的SOD活性升高(P0.05);MDA含量下降(P0.05)。4.caspase-3蛋白表达水平对照组与其他各组比较,正常人表皮黑素细胞内caspase-3蛋白表达水平较高(P0.05);随着阿魏酸溶液浓度的递增,caspase-3蛋白的表达水平逐渐下降,差异具有统计学意义(P0.05)。5.Bcl-2蛋白表达水平对照组与其他各组比较,正常人表皮黑素细胞内Bcl-2蛋白表达水平较低(P0.05);随着阿魏酸浓度的增加,Bcl-2蛋白表达水平逐渐上升,差异具有统计学意义(P0.05)。6.Bax蛋白表达水平对照组与其他各组比较,正常人表皮黑素细胞内Bax蛋白表达水平较高(P0.05);随着阿魏酸溶液浓度的递增,Bax蛋白的表达水平逐渐下降,差异具有统计学意义(P0.05)。结论1.不同浓度阿魏酸可以不同程度地降低正常人表皮黑素细胞内ROS水平。2.阿魏酸可能是通过升高SOD活性来降低正常人表皮黑素细胞内ROS水平,同时减少MDA的生成。3.阿魏酸可以抑制正常人表皮黑素细胞凋亡,可能是通过上调正常人表皮黑素细胞内Bcl-2蛋白表达水平,同时下调caspase-3及Bax蛋白表达水平来进行调控。4.阿魏酸可减少正常人表皮黑素细胞内ROS含量,并且抑制正常人表皮黑素细胞凋亡,提示阿魏酸抗黑素细胞凋亡的作用机制可能与其抗氧化效应有关。
【关键词】：阿魏酸 黑素细胞 抗氧化 凋亡
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R758.54
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-8
• 前言8-12
• 1 色素障碍性皮肤病的研究现状8
• 2 色素障碍性皮肤病与自由基损伤8-9
• 3 自由基损伤与细胞凋亡9-10
• 4 细胞凋亡蛋白Caspase- 3、Bcl-2、Bax10
• 5 阿魏酸与色素障碍性皮肤病10-11
• 6 本课题研究的目的和意义11-12
• 第一部分 黑素细胞的培养及鉴定以及阿魏酸溶液的配置12-18
• 1 实验目的12
• 2 实验材料12-14
• 3 实验方法14-16
• 4 实验结果16-17
• 5 实验讨论17-18
• 第二部分 不同浓度阿魏酸溶液对正常人表皮黑素细胞ROS、SOD、MDA水平的影响18-27
• 1 实验目的18
• 2 实验材料18-19
• 3 实验方法19-21
• 4 实验结果21-24
• 5 实验讨论24-27
• 第三部分 不同浓度阿魏酸溶液对黑素细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax表达水平的影响27-35
• 1 实验目的27
• 2 实验材料27-28
• 3 实验方法28-30
• 4 实验结果30-32
• 5 实验讨论32-35
• 全文小结35-36
• 参考文献36-39
• 附录39-42
• （一）中英文对照表39-40
• （二） 附图40-42
• 在读期间发表论文及参研课题42-43
• 致谢43

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