DEAD盒解旋酶10（DDX10）通过增强黑素瘤缺失基因2（AIM2）蛋白稳定性促进AIM2炎性体激活

发布时间：2021-08-21 00:33

　　目的研究DEAD盒解旋酶10 （DDX10）对黑素瘤缺失基因2（AIM2）炎性体通路的调控机制。方法通过在HEK293T-caspase-1-ASC-IL-1β（HEK293T-CIA）细胞系中过表达DDX家族成员和AIM2表达质粒,检测上清中的白细胞介素1β（IL-1β）的释放,筛选对AIM2炎性体通路有调控作用的分子。在DDX10缺失的THP-1细胞系,利用佛波酯（PMA）诱导分化为巨噬细胞,用脂多糖（LPS）预处理,再用poly（dA:dT）刺激巨噬细胞激活AIM2炎性体。采用ELISA检测IL-1β的释放, Western blot法检测胱天蛋白酶1（caspase-1）蛋白的切割和DDX10蛋白水平。采用免疫共沉淀法检测DDX10和AIM2的相互作用,利用免疫荧光细胞化学染色法结合共聚焦显微镜技术确定DDX10和AIM2在HEK293T细胞的共定位情况。结果过表达DDX10显著促进AIM2炎性体通路的激活,缺失DDX10显著降低AIM2炎性体通路的激活, DDX10与AIM2的带有200个氨基酸重复序列的造血性干扰素诱导核蛋白（HIN-200）结构域存在相互作用,并增强AIM... 

【文章来源】：细胞与分子免疫学杂志. 2020,36(04)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

DDX家族成员表达载体的鉴定以及ELISA检测过表达DDX家族成员分子后IL-1β在HEK293-CIA细胞上清的释放量

为了进一步确认DDX10在AIM2炎性体的调控功能, 我们在DDX10敲除(knockout of DDX10, DDX10-/-)的THP-1细胞上进行AIM2炎性体功能实验。首先通过Western blot法检测分析确定内源性DDX10在DDX10-/- THP-1细胞系中被有效敲除(图3A)。 与野生型(wide type, WT) THP-1相比, DDX10-/- THP-1在poly(dA: dT)刺激下表现出更少的IL-1β的分泌(图3B)和caspase-1活化(图3C)。 利用敲除细胞系验证了, 缺失DDX10水平显著抑制AIM2炎性体通路的激活。与DDX10促进AIM2炎性体通路的激活这一现象相一致的是, 缺失DDX10负向调控AIM2炎性体通路的激活。图3 DDX10敲除显著抑制AIM2炎性体通路的激活

DDX10敲除显著抑制AIM2炎性体通路的激活


本文编号：3354519