miR-148a-3p对银屑病患者Th细胞活化调控的影响

发布时间：2021-08-29 03:34

　　目的在前期研究的基础上进一步验证miR-148a-3p通过促凋亡蛋白Bim对银屑病发病机制中T细胞亚群分化的影响及相关免疫应答机制的调控。方法培养人T淋巴白血病（Jurkat）细胞;Bim siRNA、miR-148a-3p mimics、miR-148a-3p inhibitor,分别电转CD4⁺T细胞,RT-qPCR检测miR-148a-3p和Bim mRNA,Western blot检测Bim蛋白;通过ELISA检测培养上清中细胞因子含量。结果 Bim siRNA、miR-148a-3p mimics、miR-148a-3p inhibitor分别电转CD4⁺T细胞（Jurkat细胞）,电转效率可达84.5%。与空白组相比,过表达的miR-148a-3p可有效抑制靶基因Bim mRNA及其蛋白的表达,ELISA检测培养上清中IFN-γ及IL-17均明显升高,IL-4及IL-10均明显降低（P均<0.05）;而抑制miR-148a-3p时Bim mRNA及其蛋白的表达升高,IFN-γ明显减少（P均<0.05）,而IL-17表达... 

【文章来源】：中国皮肤性病学杂志. 2020,34(07)北大核心CSCD

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

Western blot检测Bim

为进一步探索CD4+T细胞中miR-148a-3p对Bim的调控机制,本研究在Jurkat细胞中模拟miR-148a-3p的表达以进一步观察其在银屑病发病机制中可能的作用。Jurkat细胞属于急性T细胞白血病细胞系的一种悬浮细胞,通常用于研究T细胞信号传导以及易感病毒进入的各种趋化因子受体,其比原代细胞繁殖速度快,易培养。但由于T细胞转染效率低下,本实验综合各方面条件对比之后选择电转,前期预实验通过Cy3-siRNA电转Jurkat细胞效率检测可达84.5%。本研究发现,在正常CD4+T细胞中过表达miR-148a-3p时,Bim mRNA及蛋白的表达水平显著低于对照组,且Th1细胞相关因子IFN-γ及Th17相关细胞因子IL-17均显著升高,Th2细胞相关细胞因子IL-4及Treg相关细胞因子IL-10均明显降低。在正常CD4+T细胞中沉默Bim的表达,IFN-γ及IL-17亦显著升高。而在CD4+T细胞中抑制miR-148a-3p的表达时Bim mRNA及蛋白的表达水平明显上调,同时IFN-γ明显降低,IL-4及IL-10均明显升高。这说明在银屑病患者中高表达的miR-148a-3p可导致Th1、Th17细胞异常活化,Th2细胞活化及Treg细胞免疫抑制功能减弱,抑制其表达可有效控制Th1过度活化并提高Treg细胞的免疫抑制功能,这进一步证实miR-148a-3p可能作为治疗银屑病的新靶点,为后续miR-148a-3p靶向干预寻常性银屑病病情提供了实验依据。

与mimic NC组相比,miR-148a-3p mimics组CD4+T细胞分泌的IFN-γ和IL-17显著升高(t=-12.03,-10.7;P<0.05);与无关对照(scr-siRNA)组相比,Bim siRNA组CD4+T细胞分泌的IFN-γ和IL-17也显著升高(t=-9.91,-7.92;P<0.05)。而与mimic NC组相比,miR-148a-3p mimics组IL-10及IL-4的表达水平显著下降(t=13.76,16.07;P<0.05);与无关对照(scr-siRNA)组相比,Bim siRNA组与NC组相比,IL-10及IL-4的表达水平也显著下降(t=17.15,10.02;P<0.05)。与inhibitor NC组相比,miR-148a-3p inhibitor组的IFN-γ表达显著下降(t=10.77,P<0.01),IL-17表达水平下降但不具有统计学意义,IL-10及IL-4的表达水平显著升高(t=-10.66,-30.19;P<0.01),见图5。图2 miR-148a-3p的变化对miR-148a-3p()、Bim mRNA()的表达水平影响


本文编号：3369819