G蛋白耦联受体与银屑病发病关系的研究

发布时间：2021-09-08 17:15

　　银屑病是一种常见的慢性炎症性皮肤疾病。银屑病患者皮疹一般全身泛发且通常伴随有瘙痒症状,对患病个体的生活质量可造成不小的影响。银屑病可分为多种类型,最常见的是斑块型银屑病,这种类型银屑病典型的皮肤损害表现为境界清楚的红色斑块,表面覆盖较厚的白色鳞屑。银屑病皮肤损害的病理学表现包括表皮棘层不规则增厚、真皮浅层血管扩张充血和炎症性细胞的浸润等。银屑病很多的治疗方案疗效不尽人意。G蛋白耦联受体（G-protein coupled receptors,GPCRs）超家族是目前最大的与信号转导相关的细胞表面分子家族。趋化因子受体是控制白细胞运输的一种G蛋白耦联受体,正如大多数G蛋白耦联受体一样,趋化因子是一种很好的潜在药物靶点。已有研究发现大量的趋化因子和趋化因子受体在银屑病皮损区的表达较无皮损区皮肤明显增多,但是G蛋白耦联受体是否在银屑病发病过程中发挥重要作用还不清楚。本研究利用基因芯片检测技术和实时定量PCR的方法找出3例斑块型银屑病患者受累皮肤组织和非受累皮肤组织中与G蛋白耦联受体相关的大于2倍差异基因。其中,实时定量PCR用于验证基因芯片的检测结果。我们的研究目的是从基因水平上探讨G蛋白耦... 

【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

Agilent表达谱芯片技术流程

注：利用基因芯片技术对银屑病患者的银屑病皮损和未受累皮肤组织进行差异基因的过程交由欧易生物医学科技有限公司完成。3、银屑病患者 3 对皮肤组织的 RNA 提取及 RNA 逆转录形成 cDNA：3.1 实验组和对照组共 3 对皮肤组织的 RNA 提取：（1）实验前准备：从-80℃冰箱中取出实验组和对照组 3 位银屑病患者的组织（实验组为 Ia/IIa/IIIa，对照组为 Ib/IIb/IIIb），用电子天平分别将每块称取约 0.05g 放入容积为 1.5ml 的 EP 管中，将 6 个 EP 管置于液氮中速冻后的速度使用移液器按比例加入 0.5mlTrizol 溶液，用眼科剪尽可能剪碎皮肤着使用电动匀浆机充分匀浆。将 6 管皮肤组织放置于 4℃环境中过夜。注意：在提取 RNA 时要尽可能防止 RNA 酶污染样品，提前制备灭活的 DE验操作时带好一次性手套和一次性口罩，将 RNA 酶灭活剂喷洒于实验用图 1：Agilent 表达谱芯片技术流程图 2：Agilent 表达谱芯片分析流程

图 3：本次实验课题研究的流程图根据以上实验目的和实验方法，将实验流程整理如下：在皮肤科门诊收集床病例，均为典型寻常型银屑病患者（记录年龄，病史，PASI 评分和用药情取这3位银屑病患者的典型银屑病皮损和未受累皮肤组织共3对，进行基因芯片得出 2 倍以上差异基因。整理基因芯片数据，得出基因芯片筛选结果，找出其的 GPCR 家族成员。RT-PCR 验证基因芯片筛选结果，确定 GPCR 家族中影响发病的成员。利用 5%咪喹莫特软膏（明欣利迪，四川明欣药业）30mg 均匀用于小鼠剃毛后的背部皮肤共 7 天后，建立银屑病小鼠模型，取小鼠背部银屑提取组织 RNA，逆转录为 cDNA 后同样行 RT-PCR 验证上述基因芯片筛选结是否和人皮肤组织验证结果一致，以期日后可利用小鼠银屑病模型行进一步究，寻找银屑病的基因治疗靶点。

【参考文献】：
期刊论文
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[9]基因敲除小鼠在疾病研究中的应用[J]. 桑景荭,刘欣.  生物学通报. 2009(12)
[10]基因芯片与银屑病治疗[J]. 刘雅妍,顾军.  国际皮肤性病学杂志. 2007(05)



本文编号：3391175