Hsa-miR-30e、Hsa-miR-192对HaCaT细胞表达血管内皮生长因子的调控

发布时间：2017-07-17 04:06

  本文关键词：Hsa-miR-30e、Hsa-miR-192对HaCaT细胞表达血管内皮生长因子的调控

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【摘要】：目的：探讨人工构建的hsa-miR-30e和hsa-miR-192条microRNA对人HaCaT细胞表达血管内皮生长因子(VEGF)的调控作用,预测hsa-miR-30e和hsa-miR-192在银屑病领域的应用前景。 方法：培养人永生角质形成细胞(HaCaT细胞株),培养完成后进行细胞铺板,本次实验设有hsa-miR-30e模拟物组、hsa-miR-30e抑制物组、hsa-miR-192模拟物组、hsa-miR-192抑制物组、模拟物阴性对照组、抑制物阴性对照组和空白对照组共7组,根据需要做好复孔,然后加入转染试剂进行转染,再用MTT法检测HaCaT细胞增殖活性和细胞转染的结果,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测转染细胞中VEGF基因的mRNA水平,ELISA法观察hsa-miR-30e和hsa-miR-192对VEGF蛋白表达水平的调控效应。 结果：MTT实验结果显示hsa-miR-30e模拟物、hsa-miR-30e抑制物、hsa-miR-192模拟物、hsa-miR-192抑制物、模拟物阴性对照和抑制物阴性对照六组24h、48h、72h的细胞增殖活性有统计学意义(P0.05),并且可在镜下观察到细胞生长状态良好,代表转染效果也十分良好。又可看出随着时间的推移细胞增殖抑制率逐渐升高,到72h时达到最高,说明转染率在72h最高。在24h时,可看出hsa-miR-192模拟物和hsa-miR-192抑制物两组间的细胞增殖抑制率没有明显差别,猜测可能两者间差异不大,其它各组间细胞增殖抑制率有统计学意义。48h时,hsa-miR-30e模拟物和hsa-miR-30e抑制物两组和空白对照组相比细胞增殖抑制率有统计学意义,但两者之间P0.05。但hsa-miR-192模拟物、hsa-miR-192抑制物和空白对照组各组间细胞增殖抑制率均P0.05。可能随着时间的推移,转染的效果会更加明显,组间会有些许的波动。72h时,只有hsa-miR-30e模拟物和hsa-miR-30e抑制物、hsa-miR-192模拟物和hsa-miR-192抑制物相比较细胞增殖抑制率没有统计学意义,其它各组间均有统计学意义。推测随着细胞增殖抑制率达到最高,转染率也达到最高,效果最明显,细胞也趋于稳定,达到最佳状态,促使各组间差异体现明显。qRT-PCR结果显示hsa-miR-30e模拟物组的2-ΔΔct均值为(6.04±0.07),说明提高了hsa-miR-30e丰度的VEGF基因的mRNA的表达高于正常的VEGF基因的mRNA的表达的(6.04士0.07)倍。hsa-miR-192模拟物和hsa-miR-192抑制物的VEGF基因的mRNA的表达没有检测出来,推测可能此条miRNAs不通过VEGF信号通路调控。ELISA结果显示hsa-miR-30e模拟物、hsa-miR-30e抑制物、模拟物阴性对照、抑制物阴性对照和空白对照组各组间的VEGF蛋白表达水平均有统计学意义,进一步说明hsa-miR-30e在银屑病患者中通过VEGF信号通路表达上调。hsa-miR-192模拟物、hsa-miR-192抑制物、模拟物阴性对照、抑制物阴性对照和空白对照组各组间的VEGF蛋白表达水平没有统计学意义。进一步说明可能此条miRNAs不通过VEGF信号通路调控。 结论：银屑病是一种遗传基因异常性疾病,转录水平上的hsa-miR-30e可靶向负调控大量nRNA,而这个被调控的mRNA与其它nRNA又存在错综复杂的相互影响和作用,共同形成网络式的调节结构通过多种途径来参与银屑病的发生。
【关键词】：银屑病 miRNA HaCaT细胞 VEGF 转染
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R758.63
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 缩略语说明9-10
• 前言10-13
• 研究现状、成果10-11
• 研究目的、方法11-13
• Hsa-miR-30e、Hsa-miR-192对HaCaT细胞表达血管内皮生长因子的调控13-41
• 1 对象和方法13-25
• 1.1 细胞株13
• 1.2 主要试剂及仪器13-14
• 1.3 实验方法14-25
• 2 结果25-34
• 2.1 MTT结果25-27
• 2.2 qRT-PCR结果27-30
• 2.3 ELISA结果30-34
• 3 讨论34-41
• 结论41-42
• 参考文献42-47
• 发表论文和参加科研情况说明47-48
• 附录48-49
• 综述49-68
• 综述参考文献60-68
• 致谢68

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前8条

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本文编号：551857