窄谱中波紫外线对人角质形成细胞趋化因子CCL22表达的调控作用及其机制研究

发布时间：2017-08-03 08:25

  本文关键词：窄谱中波紫外线对人角质形成细胞趋化因子CCL22表达的调控作用及其机制研究

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【摘要】：白癜风(vitiligo)是一种累及皮肤和黏膜的损容性皮肤病,特征性表现为局限性或泛发性脱色斑,病理上表现为皮损中具有功能的黑素细胞减少或消失。大量研究表明,白癜风的发生发展是遗传、环境与免疫共同作用的结果。白癜风患者外周血中CD4+、CD8+T细胞数量及比率异常,且CD4+T淋巴细胞HLA-DR表达显著增加,增殖和黏附能力均显著增强,并检测到循环皮肤归巢的黑素细胞特异性毒性杀伤性T细胞(CTL),提示T细胞免疫应答参与白癜风的发生、发展。CD4+CD25+调节型T细胞(Regulatory T cells,Treg细胞)是一种具有免疫抑制功能的T细胞亚群,它在维持机体免疫自稳和免疫耐受过程中发挥重要作用。研究发现,白癜风患者外周血及皮损中Treg细胞数量下降,且患者皮损周的CD4+T细胞和CD8+T细胞对Treg反应性均降低,表明白癜风患者存在Treg细胞功能受损。最近在白癜风动物模型研究发现,通过过继转移Treg细胞,或以CCL22基因枪诱导Treg细胞向皮肤迁移,以雷帕霉素诱导Treg细胞功能活性增强,均可减缓白癜风局部Th1型免疫应答,促进白癜风复色,提示增强Treg细胞皮肤迁移或提高其功能活性是治疗白癜风的关键。目前临床上尚无特效白癜风治疗方法,窄谱中波紫外线(narrow band-ultraviolet B,NB-UVB)因其疗效显著且副作用小而广泛应用。关于NB-UVB治疗皮肤病的作用机制,尚不完全清楚。以往有研究报道,NB-UVB照射皮肤可诱导多种趋化因子表达,从而调节免疫细胞在皮肤组织的定居及迁移,但NB-UVN是否参与调控Treg细胞及其具体机制尚不清楚。目的:本研究拟在体外细胞水平,观察NB-UVB对角质形成细胞分泌趋化因子CCL22的影响,并进一步探讨其具体机制,从而明确NB-UVB治疗是否起到诱导Treg细胞向皮肤迁移的作用。方法:1.HaCaT细胞予以不同剂量NB-UVB(0、100、200、400 mJ/cm2)照射,在不同时间点收集细胞裂解液及上清,采用RT-PCR、Western Blot及ELISA等方法检测CCL22的表达及分泌情况;2.HaCaT细胞予以不同剂量NB-UVB(0、100、200、400 mJ/cm2)照射,采用Western Blot筛选可能参与CCL22表达的信号通路;3.以NF-κB抑制剂PDTC预处理HaCaT细胞后进行NB-UVB照射,收集细胞裂解液及上清,采用RT-PCR、Western Blot及ELISA等方法检测CCL22 mRNA表达及分泌情况。结果:1.NB-UVB照射后HaCaT细胞CCL22 mRNA表达水平显著升高,并呈现NB-UVB剂量依赖性;ELISA检测证实NB-UVB照射后CCL22分泌水平呈时间依赖方式显著上调;2.HaCaT细胞经NB-UVB照射后2小时,随着NB-UVB照射剂量增强,磷酸化的NF-κB p65水平显著升高,同时CCL22蛋白表达水平也呈现上调趋势;3.NF-κB p65特异抑制剂PDTC预处理HaCaT细胞显著降低NB-UVB诱导的CCL22 mRNA及分泌水平。结论:通过本课题研究,我们首次明确NB-UVB可通过活化NF-κB信号促进角质形成细胞表达分泌趋化因子CCL22,可能促进Treg细胞向皮肤迁移,从而抑制皮损局部自身免疫反应,促进白癜风临床治疗。
【关键词】：窄谱中波紫外线(NB-UVB) 人角质形成细胞 调节型T细胞 CCL22
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R758.41
【目录】：

• 缩略语表4-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 文献回顾14-18
• 1 材料18-22
• 1.1 主要仪器设备18-19
• 1.2 主要试剂19-20
• 1.3 主要试剂配制20-22
• 2 方法22-28
• 2.1 人角质形成细胞系（HaCaT）的培养22
• 2.2 NB-UVB照射角质形成细胞的剂量及时间22-23
• 2.3 NB-UVB对角质形成细胞CCL22 mRNA表达的影响23-25
• 2.4 NB-UVB对角质形成细胞CCL22蛋白分泌的影响25-26
• 2.5 NB-UVB对角质形成细胞中CCL22蛋白表达的影响26-27
• 2.6 NB-UVB对角质形成细胞NF-kB p65信号转导通路的Western-blot检测27
• 2.7 抑制NF-kB p65活性后NB-UVB对CCL22蛋白表达及分泌的影响27-28
• 2.8 实验数据分析方法28
• 3 结果28-30
• 3.1 NB-UVB诱导HaCaT细胞表达分泌CCL2228-29
• 3.2 NB-UVB诱导HaCaT细胞表达分泌CCL22与NF-κB信号通路活化相关29
• 3.3 NB-UVB通过活化NF-κB信号通路诱导HaCaT细胞表达分泌CCL2229-30
• 4 讨论30-33
• 小结33-35
• 参考文献35-41
• 个人简历和研究成果41-42
• 致谢42

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本文编号：613407