须癣毛癣菌烯醇化酶基因的克

发布时间：2017-08-04 12:38

  本文关键词：须癣毛癣菌烯醇化酶基因的克隆、原核表达与纯化

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【摘要】：目的克隆须癣毛癣菌烯醇化酶(Enolase)基因全长c DNA,制备具有高免疫原性的须癣毛癣菌烯醇化酶重组蛋白。方法选用须癣毛癣菌肉芽肿株(774),提取总RNA,采用c DNA快速末端扩增法(RACE)克隆Enolase基因的全长序列,并对该片段进行序列测定和分析。同时对该片段进行了克隆、原核表达及纯化。结果获得须癣毛癣菌Enolase基因全长序列1 491bp,拥有一个1 317bp的开放阅读框,编码438个氨基酸,5'非编码区为106bp,3'非编码区为68bp;同源比对与断发毛癣菌Enolase同源性达100%,与红色毛癣菌同源性达98%。构建了p ET-16b-Enolase表达质粒,重组质粒都经过测序鉴定正确,p ET-16b-Enolase诱导表达后能抑制宿主菌生长,但经过条件优化后表达质粒能在BL21(DE3)菌中经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导大量表达和纯化,Western blot证实了表达的结果。结论克隆出须癣毛癣菌Enolase基因c DNA全长序列,原核表达和纯化成功,为进一步研究重组须癣毛癣菌Enolase的作用奠定了基础。
【作者单位】： 大连医科大学附属一院皮肤科;大连医科大学;大连医科大学附属一院消化内镜科;
【关键词】： 须癣毛癣菌 烯醇化酶 基因序列 原核表达 蛋白纯化
【基金】：国家自然科学基金(81071330;30640016)
【分类号】：R756
【正文快照】： 须癣毛癣菌又称石膏样毛癣菌,是一种亲人、亲动物性真菌,是临床上除红色毛癣菌外最常见的皮肤癣菌,甚至在部分地区超过红色毛癣菌位居第一[1-2]。须癣毛癣菌不仅能感染头皮、光滑皮肤、指甲等浅部组织,而且还可引发脓癣、癣结节[3]、肉芽肿及足菌肿等深部感染[4-5]。随着宠物

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1 李庆祥;杨国玲;安利佳;;须癣毛癣菌表型的研究[J];中国麻风皮肤病杂志;2007年03期

2 惠让松;杨雪琴;万哲;;三种锦纶织物对红色毛癣菌和须癣毛癣菌的生长抑制效应观察[J];解放军医学杂志;2010年10期

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本文编号：619649