西罗莫司诱导自噬对UVB辐照下HaCaT细胞增殖和凋亡的初步影响

发布时间：2017-08-18 16:13

  本文关键词：西罗莫司诱导自噬对UVB辐照下HaCaT细胞增殖和凋亡的初步影响

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【摘要】：背景 中波紫外线主要作用于表皮,角质形成细胞是其重要的靶细胞,可引起角质形成细胞DNA损伤、氧化应激、细胞凋亡,从而造成皮肤光损伤。自噬是广泛存在于真核细胞的生理现象,可以被损伤、辐射和饥饿等应激因素诱导。白噬主要功能是降解变性蛋白质及受损细胞器,对于保持细胞内环境稳定极为重要,可以维持细胞在不利因素下存活。研究证实自噬在细胞损伤中被激活并起到一定的细胞保护作用。研究发现角质形成细胞也存在自噬,并可减轻角质形成细胞的炎症。角质形成细胞中也存在自噬现象,自噬在角质形成细胞UVB相关光损伤的角色尚不明确,西罗莫司作为自噬的诱导剂是否能减轻光损伤,我们对此做了相关初步探索。 目的 观察UVB辐照HaCaT细胞是否出现自噬现象；研究西罗莫司对UVB辐照下HaCaT细胞自噬水平的影响；检测西罗莫司对UVB辐照下HaCaT细胞增殖和凋亡的初步影响。 方法 以0、25、50mJ/cm2UVB三个剂量辐照HaCaT细胞,MDC染色法观察是否出现自噬体。设置6组：空白组、DMSO组、25mJ/cm2UVB组、25mJ/cm2UVB+西罗莫司组、50mJ/cm2UVB组、50mJ/cm2UVB+西罗莫司；MDC染色法观察并比较6组细胞出现自噬的水平；MTT法测定6组HaCaT细胞增殖能力；使用Hoechest染色法,AnnexinV-FITC、PI荧光标记细胞后流式细胞仪检测西罗莫司对UVB辐照下HaCaT细胞凋亡的影响。 结果 UVB照射HaCaT细胞后出现了自噬,0、25、50mJ/cm2UVB照射组自噬体阳性细胞百分率分别为1.07%±1.85%、9.37%±1.14%、16.29%±3.03%,三组间存在显著性差异(F=37.34,P0.01)。 6组自噬体阳性细胞百分率分别为：0.56%0.79%、1.61%±2.27%、10.00%±0.47%、21.18%±3.03%、15.82%±4.13%、29.45%±1.24%,各组间均有显著性差异(F=45.23,P0.01),且25mJ/cm2UVB+西罗莫司组、50mJ/cm2UVB+西罗莫司组的自噬水平均高于UVB组。 6组的细胞增殖抑制率分别为：0.01%±4.70%、8.40%±12.43%、9.43%±2.87%、6.22%±5.88%、12.12%±1.91%、14.17%±4.30%,组间有统计学意义(F=9.836,n=5,P0.01);25mJ/cm2、50mJ/cm2UVB照射均抑制细胞增殖,25mJ/cm2UVB照射组抑制率为9.43%士2.87%,加入西罗莫司孵育后抑制率为6.22%士5.88%,减轻了抑制效应,而在50mJ/cm2UVB照射后加入西罗莫司,却增加了抑制率。 Hoechest染色法结果提示25mJ/cm2组、50mJ/cm2UVB组HaCaT细胞出现多数凋亡小体,50mJ/cm2组较25mJ/cm2组出现凋亡数量为多,加入西罗莫司干预后凋亡小体明显减少。 FCM结果提示6组早期凋亡百分比(LR)分别为：2.18%±1.30%、2.33%±1.96%、8.55%±8.44%、8.36%±0.70%、11.43%±11.81%、5.18%±5.83%,6组中晚期凋亡百分比(UR)分别为：1.72%±0.33%、2.15%±1.11%、1.72%±1.84%、12.48%±5.04%、14.24%±4.10%、8.97%±6.01%,50mJ/cm2UVB+西罗莫司组早期、中晚期凋亡百分比均低于50mJ/cm2UVB组,提示西罗莫司处理能减轻50mJ/cm2UVB辐射引起的细胞凋亡。 结论 UVB辐照HaCaT细胞出现自噬现象；西罗莫司能增加UVB辐照下HaCaT细胞的自噬水平；西罗莫司诱导自噬可减轻25mJ/cm2UVB辐照对HaCaT细胞增殖活性的抑制,而在50mJ/cm2UVB辐照下则加重对细胞的抑制。西罗莫司诱导自噬可减轻50mJ/cm2UVB辐照下HaCaT细胞的凋亡数量。西罗莫司诱导自噬对UVB辐照下HaCaT细胞光损伤有保护作用。
【关键词】：HaCaT细胞 自噬 西罗莫司 UVB
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R758.1
【目录】：

• 中文摘要8-10
• ABSTRACT10-13
• 引言13-17
• 参考文献15-17
• 一 UVB对HaCaT细胞自噬的影响17-23
• 材料17-18
• 方法18-19
• 结果19-20
• 讨论20-21
• 参考文献21-23
• 二 西罗莫司对UVB辐照下HaCaT细胞自噬的影响23-29
• 材料23
• 方法23-25
• 结果25-26
• 讨论26-27
• 参考文献27-29
• 三 西罗莫司诱导自噬对UVB辐照下HaCaT细胞增殖的影响29-36
• 材料29
• 方法29-32
• 结果32-33
• 讨论33-34
• 参考文献34-36
• 四 西罗莫司诱导自噬对UVB辐照下HaCaT细胞凋亡的影响36-44
• 材料36
• 方法36-38
• 结果38-41
• 讨论41-42
• 参考文献42-44
• 全文小结44-45
• 综述一 角质形成细胞中的自唆现象45-52
• 参考文献49-52
• 综述二 环磷酰胺在寻常型天疱疮治疗中的临床应用52-59
• 参考文献56-59
• 综述三 中外特应性皮炎诊疗指南比较59-67
• 参考文献65-67
• 附录 英文缩略语67-68
• 在读期间发表文章68-70
• 参加会议70-71
• 致谢71-74

【参考文献】

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1 李薇,熊琳,卫茂玲;我国天疱疮治疗性研究的文献评价[J];华西医学;2005年04期

2 邓一文;蒋伟文;唐国瑶;;治疗天疱疮的循证医学研究进展[J];临床口腔医学杂志;2010年11期

3 张青松;顾恒;;UVB对人皮肤成纤维细胞自噬影响的初步研究[J];中国麻风皮肤病杂志;2008年07期

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本文编号：695498