Hsa-miR-363、Hsa-miR-423-5p对HaCaT细胞表达VEGF的调控研究

发布时间：2017-08-20 04:04

  本文关键词：Hsa-miR-363、Hsa-miR-423-5p对HaCaT细胞表达VEGF的调控研究

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【摘要】：目的：探讨人工构建的hsa-miR-363和hsa-miR-423-5P两条micro RNAs对人HaCaT细胞表达血管内皮生长因子(VEGF)的调控作用,预测hsa-miR-363和hsa-miR-423-5P在银屑病领域的应用前景。 方法：培养人永生角质形成细胞(HaCaT细胞株),培养完成后进行细胞铺板,本次实验设有hsa-miR-363模拟物组、hsa-miR-363抑制物组、hsa-miR-423-5p模拟物组、hsa-miR-423-5p抑制物组、模拟物阴性对照组、抑制物阴性对照组和空白对照组共7组,根据需要做好复孔,然后加入转染试剂进行转染,再用MTT法检测HaCaT细胞增殖活性和细胞转染的成果,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测转染细胞中VEGF基因的mRNA水平,ELISA法观察hsa-miR-363和hsa-miR-423-5p对VEGF蛋白表达水平的调控效应。 结果：MTT实验结果显示hsa-miR-363模拟物、hsa-miR-363抑制物、hsa-miR-423-5p模拟物、hsa-miR-423-5p、抑制物、模拟物阴性对照和抑制物阴性对照六组24h、48h、72h的细胞增殖活性有统计学意义(P0.05),在光学显微镜下观察到细胞生长状态良好,代表转染效果良好。随着时间的推移细胞增殖抑制率逐渐升高,到72h时达到最高,同样代表转染率在72h最高。随着细胞增殖抑制率达到最高,转染率也达到最高,效果最明显,细胞也趋于稳定,达到最佳状态,促使各组间差异体现明显。qRT-PCR结果显示hsa-miR-363模拟物组、hsa-miR-363抑制物组、hsa-miR-423-5p模拟物组和hsa-miR-423-5p抑制物组VEGF基因的mRNA表达水平值与空白对照组之间的P值均大于0.05,差异无统计学意义,即hsa-miR-363模拟物和抑制物、Hsa-miR-423-5p模拟物和抑制物对VEGF基因的mRNA表达水平无影响。ELISA结果显示hsa-miR-363模拟物、hsa-miR-363抑制物和空白对照组各组间的VEGF蛋白表达水平均有统计学意义,即hsa-miR-363模拟物组的VEGF蛋白表达水平较正常组高,hsa-miR-363抑制物组的表达水平低,进一步说明hsa-miR-363可以使HaCaT细胞VEGF信号通路表达上调。Hsa-miR-423-5P模拟物、hsa-miR-423-5P抑制物、模拟物阴性对照、抑制物阴性对照和空白对照组各组间的VEGF蛋白表达水平没有统计学意义,即与正常组相比VEGF蛋白的表达水平无明显差异,进一步说明可能此条miRNA不通过VEGF信号通路调控。 结论：Has-miR-363可提高HaCaT细胞VEGF的表达,从而可以认为hsa-miR-363在银屑病患者中通过VEGF信号通路表达上调。而hsa-miR-423-5P对HaCaT细胞VEGF的表达没有影响,可认为hsa-miR-423-5P可能在银屑病患者中没有通过VEGF信号通路表达下调。银屑病是一种遗传基因异常性疾病,转录水平上的hsa-miR-363可靶向调控大量mRNA,而这个被调控的mRNA与其它1mRNA又存在错综复杂的相互影响和作用,共同形成网络式的调节结构通过VEGF等多种途径来参与银屑病的发生。
【关键词】：银屑病 hsa-miR-363 hsa-miR-423-5P HaCaT细胞 VEGF
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R758.63
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 缩略语说明9-10
• 前言10-13
• 研究现状、成果10-12
• 研究目的、方法12-13
• 1.1 对象和方法13-26
• 1.1.1 研究对象13
• 1.1.2 主要试剂及仪器13-15
• 1.1.3 实验方法15-26
• 1.2 结果26-35
• 1.2.1 MTT结果26-27
• 1.2.2 qRT-PCR结果27-31
• 1.2.3 ELISA结果31-35
• 1.3 讨论35-41
• 1.3.1 VEGF和miRNA35-39
• 1.3.2 miRNA产品39
• 1.3.3 转染39-40
• 1.3.4 不足及建议40-41
• 结论41-42
• 参考文献42-47
• 发表论文和参加科研情况说明47-48
• 附录48-49
• 综述49-65
• 综述参考文献59-65
• 致谢65

【参考文献】

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本文编号：704491