MiR-146a-Smad4在长波紫外线诱导人成纤维细胞光老化中作用机制的研究

发布时间：2017-08-30 23:01

  本文关键词：MiR-146a-Smad4在长波紫外线诱导人成纤维细胞光老化中作用机制的研究

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【摘要】：目的:探讨长波紫外线(UVA)诱导人皮肤成纤维细胞(HSF)光老化中miR-146a的表达情况,以及上调miR-146a表达对其靶基因Smad4及细胞光老化的影响。方法:人原代皮肤成纤维细胞来自健康儿童包皮,10代以内的细胞用于后续实验。以10 J/cm2 UVA照射成纤维细胞(UVA照射组),分别在0、3、7、14 d提取RNA,实时定量PCR检测miR-146a的表达量。通过慢病毒转染上调miR-146a的表达(miR-146a过表达组),在7 d、14 d后用荧光显微镜观察转染效率,并通过实时定量PCR验证细胞内miR-146a表达量。正常培养的人皮肤成纤维细胞(不做任何处理)作为空白对照组,慢病毒转染人皮肤成纤维细胞后,再用UVA照射,则为UVA照射+miR-146a过表达组。MTT法检测空白对照组、UVA照射组、miR-146a过表达组、UVA照射+miR-146a过表达组这4组细胞增殖吸光度(A)值,实时定量PCR检测各组细胞内老化相关基因p53、p16和p21 mRNA的表达,Western blot法检测各组细胞内Smad4蛋白表达情况。结果:1.重复测量的方差分析结果显示,随着培养时间的延长,UVA照射组和对照组miR-146a的表达量逐渐下降(F=213.840,P0.01);UVA照射组miR-146a的表达量较对照组出现下调(F=52.55,P0.01),且照射时间越长,下调越明显;时间与分组之间存在交互作用(F=21.241,P0.01)。2.慢病毒转染成纤维细胞后第7、14天,细胞内均有较高的荧光表达,同时实时定量PCR结果显示,转染后第7、14天,miR-146a过表达组细胞内miR-146a的表达较对照组显著增高,组间差异有统计学意义(F=42.49,P0.01)。3.析因设计的方差分析结果显示,UVA照射对细胞增殖活性有抑制作用(F=128.033,P0.01);慢病毒转染上调miR-146a的表达对细胞增殖活性也有影响(F=24.838,P0.01);UVA照射和慢病毒转染上调miR-146a的表达有交互作用(F=28.392,P0.01)。4.实时定量PCR结果显示,UVA照射可上调细胞老化相关基因p21、p53、p16mRNA的表达(F=444.909、275.110、127.228,均P0.01);慢病毒转染上调miR-146a的表达则可下调各老化相关基因mRNA的表达(F=41.141、28.178、25.932,P0.01);UVA照射与慢病毒转染上调miR-146a的表达有交互作用(F=41.785、43.101、29.413,均P0.01)。5.Western blot结果显示,UVA照射对细胞内Smad4蛋白表达有促进作用(F=133.981,P0.01);慢病毒转染上调miR-146a表达对Smad4表达也有影响(F=22.139,P0.01);UVA照射和慢病毒转染上调miR-146a表达有交互作用(F=20.076,P0.01)。结论:在UVA诱导光老化的人成纤维细胞中,miR-146a的表达受到抑制,上调其表达能够抑制Smad4的表达,起到抗细胞光老化的作用。
【关键词】：miR-146a Smad4 成纤维细胞 UVA 光老化
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R758.1
【目录】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-13
• 材料与方法13-25
• 结果25-29
• 讨论29-31
• 结论31-32
• 参考文献32-36
• 综述36-42
• 参考文献39-42
• 中英文对照缩略词表42-43
• 研究生期间发表文章43-44
• 致谢44-45

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本文编号：761970