LncRNA-1810034E14Rik对缺血性卒中后小胶质细胞功能的调控作用及机制探讨

发布时间：2022-11-12 15:17

　　研究背景:脑卒中引发的炎症反应直接影响缺血性卒中后脑损伤修复和预后,小胶质细胞活化状态及功能直接调控缺血性卒中后炎症反应,并影响卒中转归。缺血性卒中后,小胶质细胞内多种长链非编码RNA（Long non-coding RNA,LncRNA）差异表达,这些lncRNA可能参与调控小胶质细胞功能,但其具体作用机制尚未阐明。LncRNA-1810034E14Rik在小胶质细胞中广泛分布,但对其功能研究尚缺乏。在本论文中,我们探讨了缺血性卒中后lncRNA-1810034E14Rik的变化趋势,及lncRNA-1810034E14Rik能否调控缺血性卒中后小胶质细胞功能。此外,我们还进一步探索了 lncRNA-1810034E14Rik调控小胶质细胞功能的分子机制。研究方法:体外实验中,我们从C57BL/6乳鼠皮层提取原代小胶质细胞,糖氧剥夺（Oxygen glucose deprivation,OGD）后提取RNA进行lncRNA差异表达芯片分析,从中筛选出差异表达的lncRNA,并进行生物信息学分析,挑选出目标lncRNA-1810034E4Rik。我们包装lncRNA-1810034e1... 

【文章页数】：120 页

【学位级别】：博士

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中文摘要
ABSTRACT
缩略词
第一章 绪论
    1.1 缺血性卒中概述
    1.2 神经免疫炎症与缺血性卒中
        1.2.1 脑内免疫炎症与缺血性卒中
        1.2.2 外周免疫细胞与神经免疫炎症
            1) 浸润性白细胞与神经免疫炎症
            2) 淋巴细胞与神经免疫炎症
        1.2.3 靶向神经免疫炎治疗与缺血性卒中
    1.3 小胶质细胞与缺血性卒中
        1.3.1 小胶质细胞生理功能
        1.3.2 小胶质细胞激活与缺血性卒中
        1.3.3 小胶质细胞与缺血性卒中后神经免疫炎症
        1.3.4 缺血性卒中后小胶质细胞对血脑屏障的作用
        1.3.5 缺血性卒中后小胶质细胞对神经元的作用
    1.4 长链非编码RNA与缺血性卒中
        1.4.1 非编码RNA简介
        1.4.2 LncRNA的发现
        1.4.3 LncRNA的功能
    1.5 LncRNA与缺血性卒中
        1.5.1 LncRNA与缺血性卒中后神经元损伤
        1.5.2 LncRNA与缺血性卒中后内皮细胞损伤
        1.5.3 LncRNA与缺血性卒中后神经炎症
    1.6 本论文研究的重点及意义
    1.7 本论文的逻辑结构及基本思路
    1.8 参考文献
第二章 缺血性卒中后LncRNA-1810034E14Rik表达改变
    2.1 引言
    2.2 实验材料和方法
        2.2.1 实验材料
        2.2.2 实验方法
            2.2.2.1 急性缺血性卒中模型建立
            2.2.2.2 小胶质细胞分选
            2.2.2.3 RNA提取
            2.2.2.4 RT-qPCR
            2.2.2.5 原代细胞糖氧剥夺
            2.2.2.6 lncRNA芯片分析
            2.2.2.7 原代神经元培养
            2.2.2.8 原代小胶质细胞培养
            2.2.2.9 原代星形胶质细胞培养
            2.2.2.10 原代内皮细胞培养
            2.2.2.11 统计学方法
    2.3 实验结果
        2.3.1 OGD后小胶质细胞内lncRNA-1810034E14Rik显著降低
        2.3.2 缺血性卒中后神经元、星形胶质细胞和内皮细胞lncRNA-18100-34 E14 Rik无明显改变
        2.3.3 LncRNA-1810034E14Rik深度生物信息分析
    2.4 讨论
    2.5 结论
    2.6 参考文献
第三章 LncRNA-1810034E14Rik对小胶质细胞功能的影响
    3.1 前言
    3.2 实验材料与方法
        3.2.1 实验材料
        3.2.2 实验方法
            3.2.2.1 原代小胶质细胞培养
            3.2.2.2 原代神经元培养
            3.2.2.3 原代细胞糖氧剥夺实验
            3.2.2.4 总RNA提取
            3.2.2.5 RT-qPCR
            3.2.2.6 小胶质细胞慢病毒转染
            3.2.2.7 小胶质细胞siRNA干扰
            3.2.2.8 免疫荧光染色
            3.2.2.9 划痕实验
            3.2.2.10 荧光微球吞噬实验
            3.2.2.11 CCK-8细胞活性分析
            3.2.2.12 酶联免疫吸附试验
            3.2.13 原代小胶质细胞原代神经元条件共陪
            3.2.2.14 LDH释放实验
            3.2.2.15 Calcein/PI染色
            3.2.2.16 蛋白提取
            3.3.3.17 蛋白定量
            3.2.2.18 免疫印迹
            3.2.2.19 结果统计
    3.3 实验结果
        3.3.1 过表达lncRNA-1810034E14Rik减少OGD后小胶质细胞激活
        3.3.2 过表达或干扰lncRNA-1810034E14Rik对OGD后小胶质细胞迁移能力没有影
        3.3.3 过表达或干扰lncRNA-1810034E14Rik对OGD后小胶质细胞吞噬能力没有影响
        3.3.4 过表达lncRNA-1810034E14Rik改善OGD后小胶质细胞炎症状态
        3.3.5 过表达lncRNA-1810034E14Rik减轻OGD后小胶质细胞的神经
    3.4 讨论
    3.5 结论
    3.6 参考文献
第四章 LncRNA-1810034E14Rik对MCAO后脑损伤有保护作用
    4.1 前言
    4.2 实验材料与方法
        4.2.1 实验材料
        4.2.2 实验方法
            4.2.2.1 急性缺血性卒中模型建立
            4.2.2.2 脑梗死体积测定
            4.2.2.3 神经功能缺损评分
            4.2.2.4 前肢爪抓力测定
            4.2.2.5 疲劳转棒实验
            4.2.2.6 脑水肿程度检测
            4.2.2.7 总RNA提取
            4.2.2.8 RT-qPCR
            4.2.2.9 慢病毒立体定位注射
            4.2.2.10 免疫荧光染色
            4.2.2.11 酶联免疫吸附试验
            4.2.2.12 蛋白提取
            4.3.3.13 蛋白定量
            4.2.2.14 免疫印迹
            4.2.2.15 结果统计
    4.3 实验结果
        4.3.1 慢病毒立体定位注射过表达lncRNA-1810034E14Rik
        4.3.2 过表达lncRNA-1810034E14Rik减少MCAO后脑梗死体积和脑水肿
        4.3.4 过表达lncRNA-1810034E14Rik改善MCAO后小鼠运动功能障碍
        4.3.4 过表达lncRNA-1810034E14Rik改善MCAO后脑组织炎症状态
        4.3.5 过表达lncRNA-1810034E14Rik抑制MCAO后小胶质细胞激活
    4.4 讨论
    4.5 结论
    4.6 参考文献
第五章 LncRNA-1810034E14Rik通过抑制NF-κB减少缺血性卒中后小胶质细胞激活
    5.1 前言
    5.2 实验材料与方法
        5.2.1 实验材料
        5.2.2 实验方法
            5.2.2.1 原代小胶质细胞培养
            5.2.2.2 原代细胞糖氧剥夺实验
            5.2.2.3 小胶质细胞慢病毒转染
            5.2.2.4 小胶质细胞siRNA干扰
            5.2.2.5 蛋白提取
            5.3.3.6 蛋白定量
            5.2.2.7 免疫印迹
            5.2.2.8 急性缺血性卒中模型建立
            5.2.2.9 小鼠慢病毒立体定位注射
            5.2.2.10 结果统计
    5.3 结果
        5.3.1 过表达lncRNA-1810034E14Rik抑制OGD后小胶质细胞NF-κB信号通路激活
        5.3.2 过表达lncRNA-1810034E14Rik抑制MCAO后NF-κB激活
    5.4 讨论
    5.5 结论
    5.6 参考文献
攻读学位期间发表文章情况
致谢



本文编号：3706605